基于淫羊藿次苷Ⅱ单克隆抗体的ELISA检测方法的建立

发布时间：2024-03-30 04:52

　　目的建立一种检测生物样品中淫羊藿次苷Ⅱ的间接竞争酶联免疫分析方法(icELISA)。方法制备淫羊藿次苷Ⅱ免疫抗原,免疫6～8周龄雌性BALB/c小鼠,建立并筛选稳定分泌淫羊藿次苷Ⅱ单克隆抗体(mAb6A9)的杂交瘤细胞株,用此细胞通过小鼠体内诱生腹水的方法制备抗体;利用mAb6A9建立检测淫羊藿次苷Ⅱ的icELISA方法,并借助超高效液相色谱串联质谱法(UPLC-MS/MS)检验其可靠性。结果当血清淫羊藿次苷Ⅱ浓度为4.6～50.2 ng·mL^-1时,icELISA法吸光度与浓度呈良好的线性关系(Y=-1.256 9X + 3.488 8,R²=0.993),IC₅₀为15.2 ng·mL^-1,回收率为86.3%～103.8%。对淫羊藿次苷Ⅱ的血药浓度进行动态检测,结果表明icELISA与UPLC-MS/MS方法具有良好的相关性(R²=0.998),检测结果无显著性差异。结论本研究建立了一种可用于检测血清中淫羊藿次苷Ⅱ的icELISA方法,该方法简便、灵敏,有望用于生物样品中淫...

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图1淫羊藿次苷II的icELISA标准抑制曲线

表1?mAb6A9与淫羊藿次苷Ⅱ及其他化合物交叉反应化合物IC50/(ng·mL-1)CR/%淫羊藿次苷Ⅱ15.2100.0淫羊藿次苷Ⅰ85.717.7淫羊藿素1598.00.95朝藿定A2156.00.71朝藿定B2253.00.6....

图2icELISA法和与UPLC-MS/MS测定ICAII的相关性

表3icELISA及UPLC-MS/MS法测定大鼠给药后血清中淫羊藿次苷Ⅱ浓度含量()ng·mL-1给药后时间/minicELISALC-MS518.85±1.0417.87±0.631579.76±4.2378.45±2.75....

本文编号：3941837