HCV E1和HCMV IE86蛋白的性质和功能研究
发布时间：2024-03-10 03:11
本文包括两个部分：(1)人丙型肝炎病毒(Hepatitis C virus，HCV)E1基因的表达及E1蛋白质免疫学性质研究。(2)人巨细胞病毒(Human Cytomegalovirus，HCMV)最早期蛋白与转录调控蛋白相互作用研究。 本文首次报道了HCV武汉株(WH strain)全长E1基因cDNA全序列，将该cDNA分别克隆于载体pQE30、pBlueBacHisB和pcDNA3.1(-)中，分别在大肠杆菌、真核细胞和实验动物肌肉组织中进行表达。全面研究了HCV E1 cDNA在大肠杆菌和真核细胞中表达的HCV E1蛋白的抗原性和免疫原性。该研究有助于进一步了解HCV包膜蛋白的功能和揭示HCV E1的变异规律及其特点，为将E1蛋白质应用于HCV的临床诊断和研制有效的、HCV疫苗，预防和治疗丙型肝炎提供了重要的参考和依据。 HCV全长E1 cDNA含576bp，编码含192个氨基酸的蛋白质。HCV武汉株和日本株(HCV-J型)E1基因核苷酸的同源性为74.48％，编码的氨基酸的同源性为78.13％。其免疫优势表位P1(210-223aa)和P2(315-327a...
【文章页数】：210 页
【学位级别】：博士
【文章目录】：
中文摘要
英文摘要
缩略词
第一部分 人丙型肝炎病毒E1基因的表达及E1蛋白质免疫学性质研究
Ⅰ 文献综述
1.1 人丙型肝炎病毒颗粒的特征
1.1.1 病毒颗粒的形态
1.1.2 病毒颗粒的密度
1.1.3 体外感染细胞内病毒颗粒
1.2 人丙型肝炎病毒的分子生物学
1.2.1 HCV基因组结构及序列的多样性
1.2.2 HCV蛋白质的加工及病毒蛋白的性质和功能
1.3 HCV的变异和分型
1.3.1 HCV的变异
1.3.2 HCV基因型
1.3.3 HCV基因型分布
1.3.4 其它
1.4 人丙型肝炎病毒的致病性
1.4.1 急性感染
1.4.2 慢性感染
1.4.3 HCV与肝细胞癌
1.5 HCV的流行病学和临床诊断
1.5.1 HCV的流行病学
1.5.2 HCV的临床诊断
1.6 人丙型肝炎病毒的疫苗
1.6.1 HCV感染后的免疫应答
1.6.2 HCV疫苗
1.7 HCV包膜蛋白的研究进展
1.7.1 包膜蛋白区的基因结构
1.7.2 包膜蛋白区高变区
1.7.3 包膜蛋白的表达
1.7.4 包膜蛋白的结构和功能
1.7.5 包膜蛋白的免疫与疫苗研究进展
Ⅱ 研究目的
Ⅲ HCV E1基因的克隆和序列分析
3.1 材料与方法
3.1.1 材料
3.1.2 方法
3.2 结果与分析
3.2.1 HCV E1基因的PCR扩增
3.2.2 HCV E1基因的克隆和鉴定
3.2.3 含HCV E1基因表达质粒的构建和鉴定
3.2.4 HCV E1基因序列测定和分析
3.2.5 武汉株(WH strain)和日本株(HCV-J型)E1基因DNA和编码氨基酸序列比较
3.3 讨论
3.3.1 HCV E1基因在HCV分型中的作用
3.3.2 HCV E1蛋白半胱氨酸残基与E1E2复合体
3.3.3 HCV E1蛋白糖基化位点
3.3.4 HCV E1蛋白抗原表位结构位点分析
3.4 小结
Ⅳ HCV E1基因在大肠杆菌中的表达及E1蛋白质免疫学性质的研究
4.1 材料与方法
4.1.1 材料
4.1.2 方法
4.2 结果与分析
4.2.1 HCV E1基因在大肠杆菌中的表达
4.2.2 HCV E1蛋白的纯化
4.2.3 HCV E1包涵体的电镜观察
4.2.4 HCV E1蛋白的抗原性分析
4.2.5 小鼠抗HCV E1 IgG的检测
4.2.6 家兔抗HCV E1 IgG的检测
4.2.7 小鼠抗HCV E1 IgA的检测
4.2.8 小鼠抗HCV E1 SIgG的检测
4.2.9 小鼠抗HCV E1 sIgA的检测
4.2.10 CTL效应的检测
4.2.11 小鼠CD4
-、CD8
-细胞数量的变化
4.2.12 迟发型超敏反应(DTH)结果
4.2.13 安全性
4.3 讨论
4.3.1 HCV E1蛋白抗原性
4.3.2 HCV E1蛋白诱生特异性体液免疫应答
4.3.3 HCV E1蛋白诱导小鼠粘膜产生免疫应答
4.3.4 HCV E1蛋白诱生特异性细胞免疫应答
4.3.5 HCV E1基因在大肠杆菌中的表达和包涵体蛋白的形成
4.3.6 HCV E1蛋白糖基化及其免疫学性质的关系
4.4 小结
Ⅴ HCV E1在昆虫细胞中的表达及E1蛋白质免疫学性质的研究
5.1 材料与方法
5.1.1 材料
5.1.2 方法
5.2 结果与分析
5.2.1 重组转移质粒的构建
5.2.2 重组病毒的筛选与鉴定
5.2.3 HCV E1基因在昆虫细胞中的表达
5.2.4 HCV E1蛋白的纯化
5.2.5 HCV E1蛋白的抗原性分析
5.2.6 昆虫细胞和大肠杆菌表达的HCV E1蛋白抗原性比较
5.2.7 小鼠抗HCV E1 IgG的检测
5.2.8 家兔抗HCV E1 IgG的检测
5.2.9 小鼠抗HCV E1 IgA的检测
5.2.10 小鼠抗HCV E1 sIgG的检测
5.2.11 小鼠抗HCV E1 sIgA的检测
5.2.12 CTL效应的检测
5.2.13 小鼠CD4
-、CD8
-细胞数量的变化
5.2.14 迟发型超敏反应(DTH)结果
5.2.15 安全性
5.3 讨论
5.3.1 HCV E1基因在昆虫细胞中的表达
5.3.2 HCV E1蛋白的纯化
5.3.3 HCV E1蛋白的抗原性
5.3.4 HCV E1蛋白诱生特异性体液免疫应答
5.3.5 HCV E1蛋白诱导小鼠粘膜产生免疫应答
5.3.6 HCV E1蛋白诱生特异性细胞免疫应答
5.4 小结
Ⅵ HCV E1基因在真核细胞中的表达和DNA免疫
6.1 材料与方法
6.1.1 材料
6.1.2 方法
6.2 结果与分析
6.2.1 含HCV E1基因真核表达质粒的构建和鉴定
6.2.2 HCV E1基因在真核细胞中的表达
6.2.3 HCV E1基因在小鼠肌肉组织中的原位表达
6.2.4 小鼠抗HCV E1 IgG的检测
6.2.5 兔抗HCV E1 IgG的检测
6.2.6 体外CTL检测
6.2.7 CD4
-、CD8
-细胞数量的变化
6.2.8 安全性
6.3 讨论
6.3.1 HCV DNA免疫
6.3.2 HCV E1基因在HepG2细胞中的表达
6.3.3 HCV E1基因在肌肉组织中的原位表达
6.3.4 pcE1诱生的特异性体液免疫应答
6.3.5 pcE1诱生的特异性细胞免疫应答
6.3.6 提高HCV DNA免疫效果的途径
6.3.7 HCV DNA疫苗的安全性
6.4 小结
Ⅶ 总结
第二部分 人巨细胞病毒最早期蛋白与转录调控蛋白相互作用研究
Ⅰ 文献综述
1.1 人巨细胞病毒的致病性
1.2 人巨细胞病毒颗粒的特征
1.3 人巨细胞病毒基因组结构
1.4 人巨细胞病毒基因表达产物
1.4.1 HCMV的结构蛋白
1.4.2 HCMV的非结构蛋白
1.5 人巨细胞病毒立即早期基因
1.5.1 HCMV基因的时序性表达
1.5.2 HCMV IE基因的增强子
1.6 人巨细胞病毒立即早期蛋白功能
1.6.1 IE72蛋白的功能
1.6.2 IE86蛋白的功能
1.6.3 IE55蛋白的功能
Ⅱ 研究目的
Ⅲ 含HCMV IE86 cDNA重组质粒的构建
3.1 材料与方法
3.1.1 材料
3.1.2 方法
3.2 结果与分析
3.2.1 重组质粒pBIE86的构建和鉴定
3.2.2 重组质粒pGIE86的构建和鉴定
3.3 讨论
3.3.1 HCMV IE86基因
3.3.2 重组质粒pBIE86
3.3.3 重组质粒pGIE86
3.4 小结
Ⅳ HCMV IE86基因在大肠杆菌中的表达及GST-IE86融合蛋白的纯化
4.1 材料与方法
4.1.1 材料
4.1.2 方法
4.2 结果与分析
4.2.1 HCMV IE86基因在大肠杆菌中的表达
4.2.2 GST-IE86融合蛋白的纯化
4.3 讨论
4.3.1 可溶性GST-IE86融合蛋白
4.3.2 GST-IE86融合蛋白的纯化
4.3.3 HCMV IE86在昆虫细胞中的表达
4.4 小结
Ⅴ HCMV IE86蛋白与通用转录因子和转录调控因子相互作用的研究
5.1 材料与方法
5.1.1 材料
5.1.2 方法
5.2 结果与分析
5.2.1 IE86蛋白与通用转录因子TFⅡB的相互作用
5.2.2 IE86蛋白与转录调控因子SP1的相互作用
5.2.3 IE86蛋白与转录调控因子AP1的相互作用
5.2.4 IE86蛋白与转录调控因子AP2的相互作用
5.2.5 IE86蛋白与转录调控因子NF-κB的相互作用
5.3 讨论
5.3.1 HCMV IE86蛋白的功能
5.3.2 转录因子
5.3.3 HCMV IE86蛋白与TFⅡB的相互作用
5.3.4 HCMV IE86蛋白与SP1的相互作用
5.3.5 HCMV IE86蛋白与AP1的相互作用
5.3.6 HCMV IE86蛋白与AP2的相互作用
5.3.7 HCMV IE86蛋白与NF-κB的相互作用
5.3.8 HCMV IE86蛋白激活基因转录机制
5.4 小结
Ⅵ 总结
附图
参考文献
在学期间发表的论文
致谢
本文编号：3924151
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第一部分 人丙型肝炎病毒E1基因的表达及E1蛋白质免疫学性质研究
Ⅰ 文献综述
1.1 人丙型肝炎病毒颗粒的特征
1.1.1 病毒颗粒的形态
1.1.2 病毒颗粒的密度
1.1.3 体外感染细胞内病毒颗粒
1.2 人丙型肝炎病毒的分子生物学
1.2.1 HCV基因组结构及序列的多样性
1.2.2 HCV蛋白质的加工及病毒蛋白的性质和功能
1.3 HCV的变异和分型
1.3.1 HCV的变异
1.3.2 HCV基因型
1.3.3 HCV基因型分布
1.3.4 其它
1.4 人丙型肝炎病毒的致病性
1.4.1 急性感染
1.4.2 慢性感染
1.4.3 HCV与肝细胞癌
1.5 HCV的流行病学和临床诊断
1.5.1 HCV的流行病学
1.5.2 HCV的临床诊断
1.6 人丙型肝炎病毒的疫苗
1.6.1 HCV感染后的免疫应答
1.6.2 HCV疫苗
1.7 HCV包膜蛋白的研究进展
1.7.1 包膜蛋白区的基因结构
1.7.2 包膜蛋白区高变区
1.7.3 包膜蛋白的表达
1.7.4 包膜蛋白的结构和功能
1.7.5 包膜蛋白的免疫与疫苗研究进展
Ⅱ 研究目的
Ⅲ HCV E1基因的克隆和序列分析
3.1 材料与方法
3.1.1 材料
3.1.2 方法
3.2 结果与分析
3.2.1 HCV E1基因的PCR扩增
3.2.2 HCV E1基因的克隆和鉴定
3.2.3 含HCV E1基因表达质粒的构建和鉴定
3.2.4 HCV E1基因序列测定和分析
3.2.5 武汉株(WH strain)和日本株(HCV-J型)E1基因DNA和编码氨基酸序列比较
3.3 讨论
3.3.1 HCV E1基因在HCV分型中的作用
3.3.2 HCV E1蛋白半胱氨酸残基与E1E2复合体
3.3.3 HCV E1蛋白糖基化位点
3.3.4 HCV E1蛋白抗原表位结构位点分析
3.4 小结
Ⅳ HCV E1基因在大肠杆菌中的表达及E1蛋白质免疫学性质的研究
4.1 材料与方法
4.1.1 材料
4.1.2 方法
4.2 结果与分析
4.2.1 HCV E1基因在大肠杆菌中的表达
4.2.2 HCV E1蛋白的纯化
4.2.3 HCV E1包涵体的电镜观察
4.2.4 HCV E1蛋白的抗原性分析
4.2.5 小鼠抗HCV E1 IgG的检测
4.2.6 家兔抗HCV E1 IgG的检测
4.2.7 小鼠抗HCV E1 IgA的检测
4.2.8 小鼠抗HCV E1 SIgG的检测
4.2.9 小鼠抗HCV E1 sIgA的检测
4.2.10 CTL效应的检测
4.2.11 小鼠CD4
-、CD8
-细胞数量的变化
4.2.12 迟发型超敏反应(DTH)结果
4.2.13 安全性
4.3 讨论
4.3.1 HCV E1蛋白抗原性
4.3.2 HCV E1蛋白诱生特异性体液免疫应答
4.3.3 HCV E1蛋白诱导小鼠粘膜产生免疫应答
4.3.4 HCV E1蛋白诱生特异性细胞免疫应答
4.3.5 HCV E1基因在大肠杆菌中的表达和包涵体蛋白的形成
4.3.6 HCV E1蛋白糖基化及其免疫学性质的关系
4.4 小结
Ⅴ HCV E1在昆虫细胞中的表达及E1蛋白质免疫学性质的研究
5.1 材料与方法
5.1.1 材料
5.1.2 方法
5.2 结果与分析
5.2.1 重组转移质粒的构建
5.2.2 重组病毒的筛选与鉴定
5.2.3 HCV E1基因在昆虫细胞中的表达
5.2.4 HCV E1蛋白的纯化
5.2.5 HCV E1蛋白的抗原性分析
5.2.6 昆虫细胞和大肠杆菌表达的HCV E1蛋白抗原性比较
5.2.7 小鼠抗HCV E1 IgG的检测
5.2.8 家兔抗HCV E1 IgG的检测
5.2.9 小鼠抗HCV E1 IgA的检测
5.2.10 小鼠抗HCV E1 sIgG的检测
5.2.11 小鼠抗HCV E1 sIgA的检测
5.2.12 CTL效应的检测
5.2.13 小鼠CD4
-、CD8
-细胞数量的变化
5.2.14 迟发型超敏反应(DTH)结果
5.2.15 安全性
5.3 讨论
5.3.1 HCV E1基因在昆虫细胞中的表达
5.3.2 HCV E1蛋白的纯化
5.3.3 HCV E1蛋白的抗原性
5.3.4 HCV E1蛋白诱生特异性体液免疫应答
5.3.5 HCV E1蛋白诱导小鼠粘膜产生免疫应答
5.3.6 HCV E1蛋白诱生特异性细胞免疫应答
5.4 小结
Ⅵ HCV E1基因在真核细胞中的表达和DNA免疫
6.1 材料与方法
6.1.1 材料
6.1.2 方法
6.2 结果与分析
6.2.1 含HCV E1基因真核表达质粒的构建和鉴定
6.2.2 HCV E1基因在真核细胞中的表达
6.2.3 HCV E1基因在小鼠肌肉组织中的原位表达
6.2.4 小鼠抗HCV E1 IgG的检测
6.2.5 兔抗HCV E1 IgG的检测
6.2.6 体外CTL检测
6.2.7 CD4
-、CD8
-细胞数量的变化
6.2.8 安全性
6.3 讨论
6.3.1 HCV DNA免疫
6.3.2 HCV E1基因在HepG2细胞中的表达
6.3.3 HCV E1基因在肌肉组织中的原位表达
6.3.4 pcE1诱生的特异性体液免疫应答
6.3.5 pcE1诱生的特异性细胞免疫应答
6.3.6 提高HCV DNA免疫效果的途径
6.3.7 HCV DNA疫苗的安全性
6.4 小结
Ⅶ 总结
第二部分 人巨细胞病毒最早期蛋白与转录调控蛋白相互作用研究
Ⅰ 文献综述
1.1 人巨细胞病毒的致病性
1.2 人巨细胞病毒颗粒的特征
1.3 人巨细胞病毒基因组结构
1.4 人巨细胞病毒基因表达产物
1.4.1 HCMV的结构蛋白
1.4.2 HCMV的非结构蛋白
1.5 人巨细胞病毒立即早期基因
1.5.1 HCMV基因的时序性表达
1.5.2 HCMV IE基因的增强子
1.6 人巨细胞病毒立即早期蛋白功能
1.6.1 IE72蛋白的功能
1.6.2 IE86蛋白的功能
1.6.3 IE55蛋白的功能
Ⅱ 研究目的
Ⅲ 含HCMV IE86 cDNA重组质粒的构建
3.1 材料与方法
3.1.1 材料
3.1.2 方法
3.2 结果与分析
3.2.1 重组质粒pBIE86的构建和鉴定
3.2.2 重组质粒pGIE86的构建和鉴定
3.3 讨论
3.3.1 HCMV IE86基因
3.3.2 重组质粒pBIE86
3.3.3 重组质粒pGIE86
3.4 小结
Ⅳ HCMV IE86基因在大肠杆菌中的表达及GST-IE86融合蛋白的纯化
4.1 材料与方法
4.1.1 材料
4.1.2 方法
4.2 结果与分析
4.2.1 HCMV IE86基因在大肠杆菌中的表达
4.2.2 GST-IE86融合蛋白的纯化
4.3 讨论
4.3.1 可溶性GST-IE86融合蛋白
4.3.2 GST-IE86融合蛋白的纯化
4.3.3 HCMV IE86在昆虫细胞中的表达
4.4 小结
Ⅴ HCMV IE86蛋白与通用转录因子和转录调控因子相互作用的研究
5.1 材料与方法
5.1.1 材料
5.1.2 方法
5.2 结果与分析
5.2.1 IE86蛋白与通用转录因子TFⅡB的相互作用
5.2.2 IE86蛋白与转录调控因子SP1的相互作用
5.2.3 IE86蛋白与转录调控因子AP1的相互作用
5.2.4 IE86蛋白与转录调控因子AP2的相互作用
5.2.5 IE86蛋白与转录调控因子NF-κB的相互作用
5.3 讨论
5.3.1 HCMV IE86蛋白的功能
5.3.2 转录因子
5.3.3 HCMV IE86蛋白与TFⅡB的相互作用
5.3.4 HCMV IE86蛋白与SP1的相互作用
5.3.5 HCMV IE86蛋白与AP1的相互作用
5.3.6 HCMV IE86蛋白与AP2的相互作用
5.3.7 HCMV IE86蛋白与NF-κB的相互作用
5.3.8 HCMV IE86蛋白激活基因转录机制
5.4 小结
Ⅵ 总结
附图
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本文编号：3924151
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