白细胞介素-10基因修饰的兔脂肪来源间充质干细胞的构建及其对自体外周血Th17细胞的免疫调控

发布时间：2024-03-16 12:47

　　目的探究白细胞介素10(interleutin 10,IL-10)基因修饰的兔脂肪来源间充质干细胞(adipose mesenchymal stem cells,ADSCs)对自体外周血Th17细胞的免疫调控作用。方法构建IL-10基因修饰的兔脂肪来源间充质干细胞(interleukin-10 gene-modified adipose mesenchymal stem cells,IL-10-ADSCs)及荧光蛋白标记的兔脂肪来源间充质干细胞(green fluorescent protein-adipose mesenchymal stem cells,GFP-ADSCs),定量即时聚合酶链锁反应(quantitative real time polymerase chain reaction,Q-PCR)及Western blot检测细胞IL-10基因及蛋白表达水平。分离培养兔泪腺上皮细胞及自体外周血淋巴细胞(peripheral blood mononuclear cells,PBMCs)建立淋巴细胞体外激活共培养体系,分组按PBMCsADSCs为51的比例加入等量ADSCs、...

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【部分图文】：

图1IL-10重组慢病毒载体的构建及鉴定。

兔IL-10目的基因经PCR扩增后产物经琼脂糖凝胶电泳分析,基因片段大小为534bp,大小与预期结果相符,见图1A。挑取细菌培养皿单克隆菌落,过夜摇菌后进行菌液PCR鉴定,阳性转化子PCR产物大小约为900bp(PCR扩增用的是载体上的一段通用引物,故应该比534bp大30....

图2pHBLV-IL-10载体测序结果。

图1IL-10重组慢病毒载体的构建及鉴定。2.1.2慢病毒包装与滴度检测

图3IL-10重组慢病毒包装48h(A)及72h(B)GFP表达情况(×4)。

用浓缩后的慢病毒颗粒感染ADSCs,48h荧光显微镜下观察GFP表达效率约为80%以上,见图5A。应用Q-PCR对IL-10-ADSCs组及GFP-ADSCs组细胞中IL-10mRNA表达水平进行检测,结果表明,与GFP-ADSCs组相比,IL-10-ADSCs组IL-10....

图4梯度稀释病毒计算病毒滴度(×20)。

图3IL-10重组慢病毒包装48h(A)及72h(B)GFP表达情况(×4)。图5IL-10-ADSCs的构建与鉴定。

本文编号：3929657