有氧运动对早期心衰大鼠的干预中miR-10和miR-542靶蛋白的研究

发布时间：2024-03-10 21:35

　　目的:rno-mi R-10a-5p和rno-mi R-542-5p是本实验室首次鉴定的参与有氧运动干预慢性心衰进程的两个micro RNA。它们在压力负荷致慢性心衰大鼠的心室肌中低表达,以有氧运动为干预手段,可以使它们的表达量显著升高,同时伴有线粒体功能的增强及心衰进程的延缓。本研究的目的是鉴定rno-mi R-10a-5p和rnomi R-542-5p在心肌细胞中的可能靶蛋白,通过靶蛋白的功能研究探讨有氧运动干预心力衰竭的mi RNA机制,为慢性心衰的干预寻找突破口。方法:1、RIP免疫共沉淀与靶基因的筛选:在H9C2大鼠心肌细胞中过表达rno-mi R-10a-5p或rno-mi R-542-5p,通过RNA结合蛋白免疫沉淀(RNA Binding Protein Immunoprecipitation,RIP)技术,用特异性Argonaute2(Ago2)蛋白抗体对过表达mi RNA的细胞中的RNA诱导沉默复合体(RNA-induced silencing complex,RISC)进行免疫共沉淀,并提取其中富集的m RNA。通过基因芯片法检测富集的m RNA的种类,然后进行聚...

【文章页数】：64 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
Abstract
1 前言
    1.1 研究背景
    1.2 选题依据
    1.3 前期研究
    1.4 研究内容与目的
    1.5 文献综述
        1.5.1 基本定义
        1.5.2 心力衰竭的现状及有氧运动对心力衰竭有良性干预效果
        1.5.3 线粒体质量控制在心衰进程中发挥重要作用
        1.5.4 有氧运动对线粒体质量控制的影响
        1.5.5 miRNAs对心力衰竭的影响
        1.5.6 microRNAs：在促进和抑制心肌肥大中扮演着重要的角色
        1.5.7 microRNAs可双向调节基因的表达
        1.5.8 miRNAs对线粒体质量控制的影响
        1.5.9 心肌肥大
        1.5.10 与心脏发育相关的基因
2 实验材料与研究方法
    2.1 实验细胞及培养条件
    2.2 仪器及设备
    2.3 主要试剂
    2.4 主要试剂配制方法
    2.5 实验研究方法
        2.5.1 质粒提取
        2.5.2 细胞转染
        2.5.3 RIP免疫共沉淀与靶基因的筛选
        2.5.4 引物的设计
        2.5.5 琼脂糖凝胶电泳
        2.5.6 Trizol法提取总RNA
        2.5.7 SYBR?Green定量PCR
        2.5.8 蛋白质样品制备
        2.5.9 Bradford法测定蛋白质浓度
        2.5.10 免疫印迹
        2.5.11 数据统计
3 实验结果
    3.1 转染效率的检测
    3.2 RIP免疫共沉淀富集情况
    3.3 基因芯片GO富集分析
    3.4 miR-10a-5p或miR-542-5p候选靶基因预测软件计算情况
    3.5 引物序列设计及验证
    3.6 部分预测靶基因在过表达microRNA细胞中的验证
    3.7 部分预测靶基因在动物模型中的验证
    3.8 早期心衰和有氧运动对线粒体功能及自噬凋亡相关蛋白的影响
4 分析与讨论
    4.1 RNA结合蛋白免疫沉淀
    4.2 microRNAs在心力衰竭中的调控作用
    4.3 microRNAs调节基因表达的方式
    4.4 心肌细胞的增殖
5 结论与建议
    5.1 结论
    5.2 建议与不足
参考文献：
缩略词索引（Abbreviated Index）
致谢
研究生个人简历



本文编号：3925352