基于VEGF-C/PI3K/AKT信号通路研究白花蛇舌草抑制大肠癌淋巴管新生的作用机制

发布时间：2024-04-14 10:52

　　目的:通过观察白花蛇舌草(HDW)对大肠癌转移及VEGF-C表达的影响,并基于VEGF-C介导的PI3K/AKT信号通路调控探讨HDW对淋巴管内皮细胞淋巴管新生的影响,以期阐明HDW抑制大肠癌淋巴管新生及其转移的分子机制,为其临床治疗肿瘤奠定实验基础。方法:(1)采用乙醇回流提取方法制备白花蛇舌草乙醇提取物(EEHDW),并体外干预培养的人大肠癌细胞株HCT116、HCT-8,采用MTT法检测细胞活力,集落形成实验检测细胞集落形成能力,划痕实验及Transwell实验观察细胞迁移能力,Western Blot检测VEGF-C蛋白表达;(2)人淋巴管内皮细胞(HLEC)经EEHDW干预后,采用MTT法检测细胞活力,集落形成实验检测细胞存活能力,流式细胞仪检测细胞周期及细胞凋亡,Transwell实验观察细胞迁移,Tube formation检测淋巴管腔形成;(3)进一步用外源性VEGF-C刺激HLEC后,再加入EEHDW进行干预,采用MTT法检测细胞活力,流式细胞术检测细胞周期及细胞凋亡,Transwell实验观察细胞迁移,Tube formation检测淋巴管腔形成,Western B...

【文章页数】：63 页

【学位级别】：硕士

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中文摘要
Abstract
引言
实验材料与方法
    1 细胞株
    2 药物、试剂、耗材及仪器
        2.1 药物购买
        2.2 主要试剂及耗材
        2.3 主要仪器
    3 药物及常用试剂的配制
        3.1 白花蛇舌草乙醇提取物的配制
        3.2 完全培养基的配制
        3.3 MTT溶液的配制
    4 细胞实验方法
        4.1 细胞培养
        4.2 EEHDW对大肠癌细胞转移的影响
        4.3 EEHDW对HLEC淋巴管新生的影响
    5 数据处理方法
实验结果
    1 EEHDW对大肠癌细胞转移的影响
        1.1 MTT实验检测大肠癌细胞活力
        1.2 集落形成实验检测大肠癌细胞集落形成能力
        1.3 划痕(修复)实验检测EEHDW对大肠癌细胞迁移的影响
        1.4 Transwell实验观察EEHDW大肠癌细胞迁移能力的影响
        1.5 Western Blot检测EEHDW对大肠癌细胞VEGF-C蛋白表达的影响
    2 EEHDW对淋巴管内皮细胞淋巴管新生的影响
        2.1 MTT法检测EEHDW对HLEC细胞活力的影响
        2.2 集落形成实验检测HLEC细胞集落形成能力
        2.3 细胞周期实验检测EEHDW对HLEC增殖的影响
        2.4 AnnexinV/PI染色检测细胞凋亡
        2.5 Transwell实验观察EEHDW对HLEC迁移能力的影响
        2.6 Tube Formation实验观察EEHDW对HLEC管腔形成能力的影响
    3 EEHDW对VEGF-C介导的淋巴管生成及PI3K/AKT信号通路活化的影响
        3.1 MTT法检测EEHDW对VEGF-C诱导的HLEC活力的影响
        3.2 集落形成实验观察EEHDW对VEGF-C诱导的HLEC集落形成能力的影响
        3.3 细胞周期检测EEHDW对VEGF-C诱导的HLEC增殖的影响
        3.4 Annexin V/PI检测细胞凋亡
        3.5 Transwell观察EEHDW对VEGF-C诱导的HLEC迁移能力的影响
        3.6 Tube Formation实验观察EEHDW对VEGF-C诱导的HLEC管腔形成能力的影响
        3.7 Western Blot检测EEHDW对VEGF-C诱导的HIEC的PI3K/AKT信号通路蛋白表达影响
讨论
结论
问题与展望
参考文献
文献综述
    参考文献
致谢
作者简历



本文编号：3954571