FATE/BJ-HCC-2基因表达对肝癌细胞恶性生物学行为的影响
发布时间：2024-01-21 19:38
研究背景与目的肝细胞癌(Hepatocellular carcinoma,HCC)是一种预后较差的世界性恶性肿瘤,由于缺乏有效的HCC治疗策略和患者生存率低,目前对于肝细胞癌的有效治疗仍然面临巨大的挑战。因此,有必要研究新的肿瘤相关分子,为肝癌生物标志物的开发和免疫治疗提供靶点。肿瘤睾丸抗原(Cancer testis antigen,CTA)由于其自身的特点,已成为一种潜在的针对各种恶性肿瘤免疫治疗的临床生物标志物。研究发现CTA在包含HCC的多种类型恶性肿瘤中表达,且能够诱导肿瘤细胞发生上皮间充质转化(Epithelial-mesenchymal transition,EMT),从而参与肿瘤的转移过程。FATE/BJ-HCC-2是利用生物信息学方法发现及实验室验证的一种CT抗原基因。前期研究表明,FATE/BJ-HCC-2高表达于HCC,而在肝硬化和正常肝组织中不表达。本课题通过构建稳定过表达FATE/BJ-HCC-2基因的肝癌细胞株,探讨FATE/BJ-HCC-2基因过表达对肝癌细胞恶性生物学行为的影响,初步探索FATE/BJ-HCC-2基因表达在肝细胞癌中的生物学作用。研究方法...
【文章页数】：64 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
Abstract
中英文缩略词表
1 前言
2 材料与方法
2.1 实验材料
2.1.1 主要材料
2.1.2 主要试剂
2.1.3 主要实验仪器
2.2 实验方法
2.2.1 实验试剂配制
2.2.2 细胞培养的常规方法
2.2.3 Western blot方法检测FATE/BJ-HCC-2基因在肝癌细胞系中的蛋白表达情况
2.2.4 qRT-PCR法检测FATE/BJ-HCC-2基因在肝癌细胞系中mRNA表达水平
2.2.5 稳定过表达FATE/BJ-HCC-2基因的肝癌细胞株的构建
2.2.6 CCK8法检测FATE/BJ-HCC-2基因过表达对肝癌细胞体外增殖的影响
2.2.7 克隆形成实验检测FATE/BJ-HCC-2基因过表达对肝癌细胞体外克隆形成能力的影响
2.2.8 划痕实验和Transwell迁移实验检测FATE/BJ-HCC-2基因过表达对肝癌细胞体外迁移能力的影响
2.2.9 Transwell侵袭实验检测FATE/BJ-HCC-2基因过表达对肝癌细胞体外侵袭能力的影响
2.2.10 裸鼠荷瘤实验
2.2.11 Western blot方法检测FATE/BJ-HCC-2基因表达上调后EMT相关标志物的表达
2.2.12 qRT-PCR法检测FATE/BJ-HCC-2基因表达上调后EMT相关基因的表达
2.2.13 Western blot法检测FATE/BJ-HCC-2基因表达上调后有关信号通路分子的表达
2.3 统计学分析
3 结果
3.1 FATE/BJ-HCC-2在肝癌细胞系中的表达情况
3.1.1 Western blot方法检测FATE/BJ-HCC-2基因的蛋白表达情况
3.1.2 qRT-PCR法检测FATE/BJ-HCC-2基因的mRNA表达情况
3.2 构建稳定过表达FATE/BJ-HCC-2基因的肝癌细胞株
3.2.1 目的基因片段扩增结果及载体线性化结果
3.2.2 过表达FATE/BJ-HCC-2基因质粒的构建
3.2.3 在293T细胞中鉴定FATE/BJ-HCC-2基因的过表达效果
3.2.4 荧光显微镜观察FATE/BJ-HCC-2基因转染Huh7、SNU449细胞结果
3.2.5 Western blot法检测转染后Huh7、SNU449细胞中FATE/BJ-HCC-2蛋白表达情况
3.2.6 qRT-PCR法检测转染后Huh7、SNU449细胞中FATE/BJ-HCC-2 mRNA表达情况
3.3 FATE/BJ-HCC-2基因对肝癌细胞生物学功能的影响
3.3.1 FATE/BJ-HCC-2基因过表达促进肝癌细胞的体外增殖能力
3.3.2 FATE/BJ-HCC-2基因过表达促进肝癌细胞的体外克隆形成能力
3.3.3 FATE/BJ-HCC-2基因过表达促进肝癌细胞的体外迁移能力
3.3.4 FATE/BJ-HCC-2基因过表达促进肝癌细胞的体外侵袭能力
3.4 FATE/BJ-HCC-2基因表达上调在体内能够促进肿瘤的生长
3.5 FATE/BJ-HCC-2基因过表达促进肝癌细胞发生EMT及其分子机制
3.5.1 FATE/BJ-HCC-2基因过表达调控EMT相关标志物蛋白的表达水平
3.5.2 FATE/BJ-HCC-2基因过表达调控EMT相关标志物mRNA的表达水平
3.5.3 FATE/BJ-HCC-2基因过表达促进EMT相关转录因子的表达
3.5.4 FATE/BJ-HCC-2基因过表达调控肝癌细胞EMT的分子机制
4 讨论
5 结论
参考文献
综述 肿瘤睾丸抗原在肝细胞癌中表达的作用及其意义
参考文献
个人简历
致谢
本文编号：3882399
【文章页数】：64 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
Abstract
中英文缩略词表
1 前言
2 材料与方法
2.1 实验材料
2.1.1 主要材料
2.1.2 主要试剂
2.1.3 主要实验仪器
2.2 实验方法
2.2.1 实验试剂配制
2.2.2 细胞培养的常规方法
2.2.3 Western blot方法检测FATE/BJ-HCC-2基因在肝癌细胞系中的蛋白表达情况
2.2.4 qRT-PCR法检测FATE/BJ-HCC-2基因在肝癌细胞系中mRNA表达水平
2.2.5 稳定过表达FATE/BJ-HCC-2基因的肝癌细胞株的构建
2.2.6 CCK8法检测FATE/BJ-HCC-2基因过表达对肝癌细胞体外增殖的影响
2.2.7 克隆形成实验检测FATE/BJ-HCC-2基因过表达对肝癌细胞体外克隆形成能力的影响
2.2.8 划痕实验和Transwell迁移实验检测FATE/BJ-HCC-2基因过表达对肝癌细胞体外迁移能力的影响
2.2.9 Transwell侵袭实验检测FATE/BJ-HCC-2基因过表达对肝癌细胞体外侵袭能力的影响
2.2.10 裸鼠荷瘤实验
2.2.11 Western blot方法检测FATE/BJ-HCC-2基因表达上调后EMT相关标志物的表达
2.2.12 qRT-PCR法检测FATE/BJ-HCC-2基因表达上调后EMT相关基因的表达
2.2.13 Western blot法检测FATE/BJ-HCC-2基因表达上调后有关信号通路分子的表达
2.3 统计学分析
3 结果
3.1 FATE/BJ-HCC-2在肝癌细胞系中的表达情况
3.1.1 Western blot方法检测FATE/BJ-HCC-2基因的蛋白表达情况
3.1.2 qRT-PCR法检测FATE/BJ-HCC-2基因的mRNA表达情况
3.2 构建稳定过表达FATE/BJ-HCC-2基因的肝癌细胞株
3.2.1 目的基因片段扩增结果及载体线性化结果
3.2.2 过表达FATE/BJ-HCC-2基因质粒的构建
3.2.3 在293T细胞中鉴定FATE/BJ-HCC-2基因的过表达效果
3.2.4 荧光显微镜观察FATE/BJ-HCC-2基因转染Huh7、SNU449细胞结果
3.2.5 Western blot法检测转染后Huh7、SNU449细胞中FATE/BJ-HCC-2蛋白表达情况
3.2.6 qRT-PCR法检测转染后Huh7、SNU449细胞中FATE/BJ-HCC-2 mRNA表达情况
3.3 FATE/BJ-HCC-2基因对肝癌细胞生物学功能的影响
3.3.1 FATE/BJ-HCC-2基因过表达促进肝癌细胞的体外增殖能力
3.3.2 FATE/BJ-HCC-2基因过表达促进肝癌细胞的体外克隆形成能力
3.3.3 FATE/BJ-HCC-2基因过表达促进肝癌细胞的体外迁移能力
3.3.4 FATE/BJ-HCC-2基因过表达促进肝癌细胞的体外侵袭能力
3.4 FATE/BJ-HCC-2基因表达上调在体内能够促进肿瘤的生长
3.5 FATE/BJ-HCC-2基因过表达促进肝癌细胞发生EMT及其分子机制
3.5.1 FATE/BJ-HCC-2基因过表达调控EMT相关标志物蛋白的表达水平
3.5.2 FATE/BJ-HCC-2基因过表达调控EMT相关标志物mRNA的表达水平
3.5.3 FATE/BJ-HCC-2基因过表达促进EMT相关转录因子的表达
3.5.4 FATE/BJ-HCC-2基因过表达调控肝癌细胞EMT的分子机制
4 讨论
5 结论
参考文献
综述 肿瘤睾丸抗原在肝细胞癌中表达的作用及其意义
参考文献
个人简历
致谢
本文编号：3882399
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