【摘要】：他克莫司是器官抑制患者需长期服用的一线免疫抑制剂,其治疗窗窄,浓度过高时容易产生肝毒性。在我国,五酯片常与他克莫司配伍使用,以防治器官抑制患者可能出现的药源性肝损伤。服用他克莫司后,患者免疫力下降,感染曲霉菌的风险增加,因此对曲霉菌有很好抗菌活性的伏立康唑就成为与他克莫司联合使用的首选药物。伏立康唑与他克莫司合用不仅能治疗器官移植患者高发的真菌感染,还能增加他克莫司的AUC;已有研究表明五酯片与他克莫司配伍使用,可以防治器官移植患者可能出现的药源性肝损伤,此外,五酯片明显增加他克莫司的AUC。然而目前几乎没有研究关注五酯片与伏立康唑合用时的药物相互作用,这可能会给临床上两药合用造成一定的困难。本研究考察了五酯片对大鼠体内伏立康唑药代动力学的影响,并对影响机制进行了进一步的探讨,可为临床上伏立康唑的合理用药提供科学依据与参考。目的:建立准确测定血浆中伏立康唑浓度LC-MS/MS的方法,用该方法在整体动物水平研究五酯片及主要成分对伏立康唑药代动力学的影响,并探索五酯片影响伏立康唑药代动力学的相关机制。方法:1.采用三重四级杆液相质谱联用仪建立了测定伏立康唑浓度的LC-MS/MS方法,按照SFDA的对检测方法的要求,对该方法的专属性、标准曲线、基质效应、回收率、精密度和稳定性进行了考察。2.以SD雄性大鼠为动物模型,对照组和实验组大鼠分别灌胃蒸馏水或五酯片或五酯片主要成分后注射或灌胃伏立康唑,在不同时间点采血,血浆经处理后进样,测伏立康唑浓度,用DAS药动学软件处理数据。3.在Caco-2单层细胞膜双向转运实验中,在Transwell板的A板底部铺一层Caco-2细胞,向实验组的Transwell板的A板或B2中加入伏立康唑和不同浓度的五酯片提取物及其主要成分,向对照组的Transwell板的A板或B2中加入伏立康唑,开始孵育,孵育结束后计算伏立康唑双向转运的渗透系数,通过渗透系数计算外排率,比较不同浓度的五酯片提取物及其主要成分对伏立康唑外排率的影响,并与空白组伏立康唑外排率相比较。4.采用9种CYP450酶的特异性抑制剂为阳性对照剂,以9种CYP450酶的特异性底物为底物,在人肝微粒体中加入NADPH辅酶、特异性底物、特异性抑制剂或五酯片提取物或五酯片主要成分后反应开始,反应结束后,用HPLC-MS检测不同代谢产物的量,通过比较加入抑制剂和不加抑制剂时代谢产物的量,计算抑制率。结果:1.所建立的LC-MS/MS方法灵敏度高,专属性性好,标准曲线合理,基质效应15%,回收率范围为87.2%~103.2%,批内精密度8.03%,批间精密度4.14%,待测物在室温放置,反复冻融,-20℃冰箱中长期保存过程中无明显降解。2.与对照组相比,单次灌胃五酯片使大鼠体内伏立康唑的AUC增加了80.2%(p0.05);连续14天灌胃五酯片使大鼠体内伏立康唑的AUC增加了66.4%(p0.05)。与空白对照组相比,单次合用五味子醇乙、五味子甲素使灌胃给药伏立康唑的AUC分别升高47.3%(p0.05)和44.3%(p0.05);使静脉注射伏立康唑的AUC分别升高37.4%(p0.05)和47.5%(p0.05);连续14天灌胃五味子醇乙,五味子甲素使灌胃给药伏立康唑AUC分别增加30.1%(p0.05)和22.5%(p0.05);而使注射给药伏立康唑AUC分别升高29.3%(p0.05)和36.5%(p0.05)。3.与空白对照相比,五酯片及其主要成分可降低伏立康唑在Caco-2单层细胞膜双向转运实验中的外排率。合用一系列浓度的五酯片提取物使伏立康唑的外排率从3.7下降到0.7(p0.05)。合用一系列浓度的五味子甲素、五味子醇乙分别使伏立康唑的外排率从3.7下降到0.6(p0.05)、1.0(p0.05)4.与空白对照相比,五酯片及其主要成分对常见CYP450酶活性均有一定程度的抑制作用,其中,对CYP2C19、CYP3A4的活性抑制作用较强,对CYP2C19半数抑制浓度(IC50)值小于625μg/m L;对CYP3A4半数抑制浓度(IC50)值小于39.1μg/m L。五味子甲素对CYP2C19的IC50值约为50μM;五味子醇乙对CYP3A4的IC50值6.25μM。结论:1.该方法灵敏度高,专属性好,标准曲线合理,回收率高,稳定性良好,可用于后续试验中伏立康唑的浓度检测。2.说明单次及长期合用五酯片或五酯片主要成分均可明显升高大鼠体内伏立康唑的AUC。3.另外五酯片对伏立康唑在小肠的吸收可能会产生一定的影响。4.说明五酯片影响伏立康唑药动学的机制可能是抑制CYP2C19和CYP3A4的活性。
【图文】：
伏立康唑结构
伏立康唑和D3-伏立康唑的氢加合物全扫描质谱图
【学位授予单位】：广东药科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：R285.5
【参考文献】
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