补肾化痰法对肥胖PCOS模型大鼠卵泡发育影响的实验研究

发布时间：2020-03-18 12:42

【摘要】：目的本研究以来曲唑加高脂诱导肥胖型多囊卵巢模型大鼠为研究对象,通过观察补肾化痰法对肥胖PCOS大鼠血清性激素、卵巢形态学以及卵巢组织颗粒细胞中Smad3、Cyp19al及CCND2mRNA表达的影响,探索补肾化痰法调控PCOS卵泡发育的机制,从而为该法改善肥胖PCOS卵泡发育障碍提供一定的科学依据。方法选取7~8周龄SD雌性大鼠,通过来曲唑加高脂灌胃制备肥胖PCOS模型,根据大鼠阴道脱落细胞学涂片及体重的变化,筛选出造模成功的大鼠,根据实验要求分为模型对照组、中药高剂量组、中药中剂量组、中药低剂量组、达英-35组,再加空白对照组。采取补肾化痰中药干预21天后,用放射免疫法检测大鼠血清FSH、E_2、LH及T含量的变化,HE染色观察卵巢组织病理学改变,Real-time PCR测定卵巢颗粒细胞中Smad3、Cyp19al及CCND2的mRNA表达量,免疫组化法检测大鼠卵巢颗粒细胞中Ki-67的表达。结果(1)与模型对照组比较,中药高、中剂量组及达英-35组大鼠体质量增长率降低,差异有统计学意义(P0.05);(2)与模型对照组比较,中药及达英-35组初级卵泡数、窦状卵泡数、囊状卵泡数及闭锁卵泡数减少,成熟卵泡数及黄体数增加,差异有统计学意义(P0.05);(3)与模型对照组比较,中药高、中剂量组及达英-35组清FSH、E_2增高,差异有统计学意义(P0.05),中药高、中剂量组及达英-35组T含量降低,中药中剂量组及达英-35组LH含量降低,差异有统计学意义(P0.05);(4)与空白对照组比较,模型对照组卵巢颗粒细胞中Smad3、Cyp19al及CCND2mRNA的表达降低(P0.05);与模型对照组比较,中药高、中剂量组及达英-35组卵巢颗粒细胞中Smad3、Cyp19al及CCND2mRNA的表达升高(P0.05);(5)与空白对照组比较,模型对照组卵巢组织颗粒细胞中Ki-67的表达降低(P0.05);与模型对照组比较,中药中剂量组及达英-35组卵巢组织颗粒细胞中Ki-67的表达升高(P0.05)。结论(1)补肾化痰法可抑制肥胖PCOS大鼠卵巢多囊样改变及改善卵泡发育障碍。(2)补肾化痰法可通过降低T、LH水平,提高FSH及E_2的水平,纠正机体性激素紊乱的状态,调节卵巢功能。(3)补肾化痰法可能是通过促进卵巢颗粒细胞TGFβ/Smad3信号转导,进而增强Cyp19almRNA的表达,促进雄激素转化为雌激素分泌,维持机体性激素稳态;及可能通过调节卵巢颗粒细胞TGFβ/Smad3信号转导,进而增强CCND2的表达,促进颗粒细胞增殖以及卵泡发育与成熟。
【图文】：

（1）向 GC 中加入 1ml TRIZOL 裂解液裂解细胞，用枪细胞裂解。（2）将细胞转移至 1.5mlEP 管中入 0.2ml 氯仿，充分摇匀左右，，4℃低温离心机 12000r/min，离心 10min。（3）用移液器吸取上清液，转移上清液至新的 EP 管中，醇，混匀后，室温孵育 5min 左右，4℃低温离心机 12000r/min（4）弃上清液，加入 75%的乙醇 1ml 清洗沉淀，离心机心 2min。（5）除去乙醇溶液，室温干燥沉淀 5~10min，加入去离子（6）取 3μL 细胞总 RNA 采用 1%琼脂糖凝胶电泳检验 RN凝胶成像系统观察，判断 RNA 的完整性。如图中 RNA 条带清弥散带，28S 条带约为 18S 条带亮度的 2 倍，提取的 RNA 质续实验。

26中药低剂量组（100×） 达英-35 组（100×）图 6 各组大鼠卵巢组织 HE 染色1.3 补肾化痰法对各组大鼠性激素水平的影响.3.1 补肾化痰法对各组大鼠 FSH、E2的影响与空白对照组比较，模型对照组大鼠血清 FSH 及 E2的水平降低，
【学位授予单位】：成都中医药大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R285.5;R-332

【参考文献】

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本文编号：2588732