PI3K/mTOR通路在染矽尘肺泡巨噬细胞自噬中的作用研究

发布时间：2024-04-24 22:24

　　目的通过给予PI3K抑制剂LY294002、m TOR抑制剂雷帕霉素(RAPA)、抗氧化剂N-乙酰半胱氨酸(NAC),观察大鼠肺泡巨噬细胞NR8383的自噬活动变化,探讨PI3K/Akt/m TOR信号通路在染尘NR8383细胞自噬活动的调控作用及抗氧化剂NAC是否通过该通路来影响矽肺的发生和发展。方法常规培养NR8383细胞,染尘3h、6h、12h、20h、24h后,分别收集细胞上清液并采用双抗体夹心酶联免疫吸附法(ELISA法)检测肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、转化生长因子-βⅠ(TGF-βⅠ)的分泌水平,确定体外巨噬细胞染尘模型时间。在确定的染尘时间点给予LY294002、RAPA和NAC,采用ELISA法检测、方差分析或者Kruskal-Wallis H法分析TNF-α、TGF-βⅠ的表达水平;采用蛋白免疫印迹方法测定细胞内Akt和p-m TOR蛋白水平;采用细胞免疫荧光法和蛋白免疫印迹方法(Western blotting)观察和测定自噬的发生情况。方差分析或者Kruskal-Wallis H法分析各组自噬蛋白表达情况。结果1 NR8383细胞染尘3h、6h、12h、20h...

【文章页数】：52 页

【学位级别】：硕士

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摘要
Abstract
英文缩略表
引言
第1章 实验研究
    1.1 实验细胞
        1.1.1 细胞培养、冻存和复苏
        1.1.2 细胞的处理及分组
    1.2 实验试剂及器材
        1.2.1 主要仪器及材料
        1.2.2 主要试剂
        1.2.3 主要溶液配制
    1.3 研究内容和方法
        1.3.1 ELISA法检测NR8383细胞上清液中TNF-α 和TGF-βⅠ的分泌水平
        1.3.2 Western blotting法检测蛋白的表达
        1.3.3 激光共聚焦法观察自噬的表达
    1.4 统计分析
    1.5 结果
    1.6 讨论
    1.7 小结
    参考文献
第2章 综述 自噬及其在器官纤维化中的研究进展
    2.1 自噬的概述
        2.1.1 自噬的发展、分类及功能
        2.1.2 自噬的发生过程和发生机制
        2.1.3 自噬的方法
    2.2 自噬信号转导通路
    2.3 自噬与器官纤维化
    参考文献
结论
致谢
导师简介
作者简介
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本文编号：3963590