P25/CDK5-p53通路在BaP致神经细胞凋亡中的作用研究

发布时间：2023-12-23 20:41

　　[目的]利用大鼠原代培养皮质神经细胞研究p25/CDK5-p53通路在BaP致神经细胞凋亡中作用,探讨BaP致神经细胞凋亡的作用机制。 [方法] 1.体外原代大鼠皮质神经元培养：采用新生1-3天的SD大鼠,在无菌条件下取出大脑皮质并用0.25%胰酶消化,以1000个／mm2接种神经细胞。在神经细胞培养第五天左右,选取生长良好的同批次细胞,以BaP同时加入S9染毒,染毒浓度分别为10、20、40μmol/L并设空白对照组、溶剂对照(DMSO)组和S9对照组,染毒后继续培养观察,分别于染毒0,6,12,24,48h后处理细胞。 2.①显微镜观察神经细胞形态学变化,采用MTT法和流式细胞仪分别检测神经细胞活力和凋亡率；②单细胞琼脂糖凝胶电泳和BPDE-DNA Adduct ELISA试剂盒检测神经细胞DNA损伤情况；③流式细胞仪检测神经细胞活性氧变化情况；④Western-blot法检测神经细胞p25/CDK5-p53通路相关蛋白calpain、p35/25、 CDK5、p53和p-p53Ser15表达；⑤抑制calpain活性和CDK5活性后,检测上述相关指标变化情况。⑥RT-PCR检测c...

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