以HMGB1为靶点防治糖尿病性角膜病变的有效性及其机制研究
发布时间：2024-04-25 03:59
目的糖尿病性角膜病变(Diabetic Keratopathy,DK)是常见的糖尿病眼部并发症,其发病机制尚未完全明确,临床尚无有效的手术或药物等干预措施。因此,研究DK新的疾病机制、新的治疗靶标和有效防治措施具有重要的临床意义。本研究将探讨链脲佐菌素(Streptozocin,STZ)诱导的Ⅰ型糖尿病模型小鼠角膜病理生理改变和上皮/神经损害,以及高迁移率族蛋白B1(High Mobility Group B1,HMGB1)及下游信号因子晚期糖基化终产物受体(Receptor of Advanced Glycation Endproducts,RAGE)在DK发生发展中的变化;探讨抑制HMGB1在糖尿病模型小鼠角膜上皮/神经损伤后修复中的作用;构建载药甘草酸二钾纳米胶束滴眼液后,评价甘草酸二钾纳米胶束滴眼液协同调控HMGB1信号通路促进糖尿病模型小鼠角膜上皮/神经损伤后的修复。方法1.C57BL/6J小鼠腹腔注射STZ建立Ⅰ型糖尿病模型。于造模成功后4、8、12、16周测量同龄正常鼠和糖尿病鼠的体重、血糖、泪液分泌量、眼压等指标;利用裂隙灯观察各组小鼠角膜荧光素钠与虎红着色情况;扫描电...
【文章页数】：98 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
abstract
前言
第一章 综述
1.1 糖尿病性角膜病变中眼部相关变化
1.1.1 角膜变化
1.1.1.1 角膜上皮层
1.1.1.2 Bowman层
1.1.1.3 基质层
1.1.1.4 Descemet膜
1.1.1.5 内皮层
1.1.2 结膜参与
1.1.3 泪膜的变化
1.1.4 糖尿病角膜神经
1.1.5 角膜触觉
1.2 糖尿病角膜病变分子机制
1.2.1 生长因子
1.2.2 核因子红细胞2相关因子2(Nrf2)
1.2.3 晚期糖基化终产物和活性氧
1.2.4 Sirtuin1
1.2.5神经激肽1
1.3 HMGB1与糖尿病眼病
1.3.1 HMGB1及其相关信号通路
1.3.2 HMGB1信号通路与糖尿病并发症
1.3.3 HMGB1信号通路与眼部疾病
1.3.4 HMGB1抑制剂在治疗疾病中的作用
1.4 甘草酸概述
1.4.1 甘草酸简介
1.4.2 甘草酸的安全问题
1.4.3 甘草酸抑制HMGB1的生成与释放
1.5 Gen
1.5.1 Gen基本介绍
1.5.2 Gen药理活性
1.5.3 Gen在眼科领域的应用
1.6 技术路线与研究意义
第二章 HMGB1信号通路在糖尿病性角膜病变发生发展中的作用及其机制
2.1 材料与方法
2.1.1 材料试剂与仪器设备
2.1.1.1 实验动物
2.1.1.2 实验耗材与试剂
2.1.1.3 实验仪器
2.1.1.4 主要溶液的配制
2.1.2 实验方法
2.1.2.1 糖尿病小鼠模型(Ⅰ型)的建立
2.1.2.2 小鼠眼压及角膜敏感度测试
2.1.2.3 小鼠眼泪分泌量检测
2.1.2.4 小鼠眼前节裂隙灯观察
2.1.2.5 小鼠角膜扫描电镜(SEM)观察
2.1.2.6 小鼠角膜上皮凋亡检测(TUNEL染色)
2.1.2.7 小鼠角膜神经染色
2.1.2.8 小鼠角膜上皮损伤修复观察
2.1.2.9 蛋白质印迹法(Western blot法)
2.1.2.10 免疫组化
2.1.2.11 统计分析
2.2 结果
2.2.1 糖尿病小鼠基本变化
2.2.2 糖尿病小鼠眼表变化
2.2.3 糖尿病小鼠角膜上皮与角膜内皮微观结构的改变
2.2.4 糖尿病小鼠上皮细胞凋亡严重
2.2.5 糖尿病小鼠角膜神经密度与角膜敏感度的改变
2.2.6 糖尿病病程进展中角膜组织中HMGB1表达变化规律
2.2.7 糖尿病小鼠角膜上皮愈合延迟
2.2.8 糖尿病小鼠角膜神经损伤修复延迟
2.2.9 角膜上皮损伤后小鼠角膜中HMGB1表达变化
2.3 本章讨论与小结
第三章 抑制HMGB1信号通路对糖尿病性角膜病变的治疗作用
3.1 材料和方法
3.1.1 材料试剂与仪器设备
3.1.1.1 实验动物
3.1.1.2 实验试剂与仪器
3.1.2 实验方法
3.1.2.1 糖尿病小鼠角膜上皮损伤修复模型的建立
3.1.2.2 糖尿病小鼠角膜神经染色
3.1.2.3 Western blot法
3.1.2.4 统计分析
3.2 结果
3.2.1 结膜下分别注射甘草酸二钾对糖尿病小鼠角膜上皮损伤修复的作用
3.2.2 结膜下分别注射甘草酸二钾对糖尿病小鼠角膜神经损伤修复的作用
3.2.3 Western blot实验结果
3.3 本章讨论与小结
第四章 甘草酸二钾纳米胶束多靶点调控HMGB1信号通路防治糖尿病性角膜病变
4.1 材料和方法
4.1.1 实验材料与仪器设备
4.1.1.1 实验动物
4.1.1.2 实验试剂与耗材
4.1.1.3 实验仪器
4.1.2 实验方法
4.1.2.1 甘草酸二钾-Gen纳米胶束滴眼液的制备
4.1.2.2 甘草酸二钾-Gen纳米胶束滴眼液的表征
4.1.2.3 甘草酸二钾-Gen纳米胶束滴眼液的储存稳定性
4.1.2.4 甘草酸二钾-Gen纳米胶束滴眼液抗氧化能力考察
4.1.2.5 甘草酸二钾-Gen纳米胶束滴眼液PAMPA及体外释放
4.1.2.6 甘草酸二钾-Gen纳米胶束滴眼液安全性考察
4.1.2.7 甘草酸二钾-Gen纳米胶束滴眼液小鼠角膜吸收
4.1.2.8 甘草酸二钾-Gen纳米胶束滴眼液药效学实验
4.1.2.9 统计分析
4.2 结果
4.2.1 甘草酸二钾-Gen纳米胶束滴眼液的处方优化
4.2.2 甘草酸二钾-Gen纳米胶束滴眼液的外观及微观特征
4.2.3 甘草酸二钾-Gen纳米胶束滴眼液的稳定性
4.2.4 甘草酸二钾-Gen纳米胶束滴眼液的抗氧化能力
4.2.5 甘草酸二钾显著促进Gen的透膜性与释放能力
4.2.6 甘草酸二钾-Gen纳米胶束滴眼液的安全性
4.2.7 甘草酸二钾促进小鼠角膜的在体吸收
4.2.8 甘草酸二钾-Gen纳米胶束滴眼液药效学结果
4.2.8.1 甘草酸二钾-Gen纳米胶束滴眼液促进糖尿病小鼠角膜上皮损伤修复
4.2.8.2 甘草酸二钾-Gen纳米胶束滴眼液促进角膜上皮损伤后角膜神经和敏感度修复
4.2.8.3 甘草酸二钾-Gen纳米胶束滴眼液有效抑制糖尿病角膜HMGB1 信号通路
4.2.8.4 甘草酸二钾-Gen纳米胶束滴眼液显著降低糖尿病角膜中炎症因子的表达
4.3 本章讨论与小结
结论与展望
参考文献
致谢
攻读硕士学位期间发表的学术论文目录
本文编号：3963972
【文章页数】：98 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
abstract
前言
第一章 综述
1.1 糖尿病性角膜病变中眼部相关变化
1.1.1 角膜变化
1.1.1.1 角膜上皮层
1.1.1.2 Bowman层
1.1.1.3 基质层
1.1.1.4 Descemet膜
1.1.1.5 内皮层
1.1.2 结膜参与
1.1.3 泪膜的变化
1.1.4 糖尿病角膜神经
1.1.5 角膜触觉
1.2 糖尿病角膜病变分子机制
1.2.1 生长因子
1.2.2 核因子红细胞2相关因子2(Nrf2)
1.2.3 晚期糖基化终产物和活性氧
1.2.4 Sirtuin1
1.2.5神经激肽1
1.3 HMGB1与糖尿病眼病
1.3.1 HMGB1及其相关信号通路
1.3.2 HMGB1信号通路与糖尿病并发症
1.3.3 HMGB1信号通路与眼部疾病
1.3.4 HMGB1抑制剂在治疗疾病中的作用
1.4 甘草酸概述
1.4.1 甘草酸简介
1.4.2 甘草酸的安全问题
1.4.3 甘草酸抑制HMGB1的生成与释放
1.5 Gen
1.5.1 Gen基本介绍
1.5.2 Gen药理活性
1.5.3 Gen在眼科领域的应用
1.6 技术路线与研究意义
第二章 HMGB1信号通路在糖尿病性角膜病变发生发展中的作用及其机制
2.1 材料与方法
2.1.1 材料试剂与仪器设备
2.1.1.1 实验动物
2.1.1.2 实验耗材与试剂
2.1.1.3 实验仪器
2.1.1.4 主要溶液的配制
2.1.2 实验方法
2.1.2.1 糖尿病小鼠模型(Ⅰ型)的建立
2.1.2.2 小鼠眼压及角膜敏感度测试
2.1.2.3 小鼠眼泪分泌量检测
2.1.2.4 小鼠眼前节裂隙灯观察
2.1.2.5 小鼠角膜扫描电镜(SEM)观察
2.1.2.6 小鼠角膜上皮凋亡检测(TUNEL染色)
2.1.2.7 小鼠角膜神经染色
2.1.2.8 小鼠角膜上皮损伤修复观察
2.1.2.9 蛋白质印迹法(Western blot法)
2.1.2.10 免疫组化
2.1.2.11 统计分析
2.2 结果
2.2.1 糖尿病小鼠基本变化
2.2.2 糖尿病小鼠眼表变化
2.2.3 糖尿病小鼠角膜上皮与角膜内皮微观结构的改变
2.2.4 糖尿病小鼠上皮细胞凋亡严重
2.2.5 糖尿病小鼠角膜神经密度与角膜敏感度的改变
2.2.6 糖尿病病程进展中角膜组织中HMGB1表达变化规律
2.2.7 糖尿病小鼠角膜上皮愈合延迟
2.2.8 糖尿病小鼠角膜神经损伤修复延迟
2.2.9 角膜上皮损伤后小鼠角膜中HMGB1表达变化
2.3 本章讨论与小结
第三章 抑制HMGB1信号通路对糖尿病性角膜病变的治疗作用
3.1 材料和方法
3.1.1 材料试剂与仪器设备
3.1.1.1 实验动物
3.1.1.2 实验试剂与仪器
3.1.2 实验方法
3.1.2.1 糖尿病小鼠角膜上皮损伤修复模型的建立
3.1.2.2 糖尿病小鼠角膜神经染色
3.1.2.3 Western blot法
3.1.2.4 统计分析
3.2 结果
3.2.1 结膜下分别注射甘草酸二钾对糖尿病小鼠角膜上皮损伤修复的作用
3.2.2 结膜下分别注射甘草酸二钾对糖尿病小鼠角膜神经损伤修复的作用
3.2.3 Western blot实验结果
3.3 本章讨论与小结
第四章 甘草酸二钾纳米胶束多靶点调控HMGB1信号通路防治糖尿病性角膜病变
4.1 材料和方法
4.1.1 实验材料与仪器设备
4.1.1.1 实验动物
4.1.1.2 实验试剂与耗材
4.1.1.3 实验仪器
4.1.2 实验方法
4.1.2.1 甘草酸二钾-Gen纳米胶束滴眼液的制备
4.1.2.2 甘草酸二钾-Gen纳米胶束滴眼液的表征
4.1.2.3 甘草酸二钾-Gen纳米胶束滴眼液的储存稳定性
4.1.2.4 甘草酸二钾-Gen纳米胶束滴眼液抗氧化能力考察
4.1.2.5 甘草酸二钾-Gen纳米胶束滴眼液PAMPA及体外释放
4.1.2.6 甘草酸二钾-Gen纳米胶束滴眼液安全性考察
4.1.2.7 甘草酸二钾-Gen纳米胶束滴眼液小鼠角膜吸收
4.1.2.8 甘草酸二钾-Gen纳米胶束滴眼液药效学实验
4.1.2.9 统计分析
4.2 结果
4.2.1 甘草酸二钾-Gen纳米胶束滴眼液的处方优化
4.2.2 甘草酸二钾-Gen纳米胶束滴眼液的外观及微观特征
4.2.3 甘草酸二钾-Gen纳米胶束滴眼液的稳定性
4.2.4 甘草酸二钾-Gen纳米胶束滴眼液的抗氧化能力
4.2.5 甘草酸二钾显著促进Gen的透膜性与释放能力
4.2.6 甘草酸二钾-Gen纳米胶束滴眼液的安全性
4.2.7 甘草酸二钾促进小鼠角膜的在体吸收
4.2.8 甘草酸二钾-Gen纳米胶束滴眼液药效学结果
4.2.8.1 甘草酸二钾-Gen纳米胶束滴眼液促进糖尿病小鼠角膜上皮损伤修复
4.2.8.2 甘草酸二钾-Gen纳米胶束滴眼液促进角膜上皮损伤后角膜神经和敏感度修复
4.2.8.3 甘草酸二钾-Gen纳米胶束滴眼液有效抑制糖尿病角膜HMGB1 信号通路
4.2.8.4 甘草酸二钾-Gen纳米胶束滴眼液显著降低糖尿病角膜中炎症因子的表达
4.3 本章讨论与小结
结论与展望
参考文献
致谢
攻读硕士学位期间发表的学术论文目录
本文编号：3963972
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