低表达衰老标记蛋白30对高钙状态下人晶状体上皮细胞增殖和氧化的影响

发布时间：2023-07-26 20:10

　　目的:探讨高钙状态下衰老标记蛋白30(SMP30)低表达对人晶状体上皮细胞(LECs)系SRA01/04增殖、氧化应激的影响。方法:设计3条干扰SMP30靶向基因RGN表达的RNAi序列(KD1～3),以空载序列为阴性对照组(NCKD),构建慢病毒载体并感染SRA01/04细胞,同时以未感染的SRA01/04细胞作空白对照组(CON)。RT-PCR筛选干扰效率最高的慢病毒载体用于后续实验。采用含15mmol/L CaCl₂的完全培养基处理细胞24h模拟发生白内障时人LECs的病理状态,通过BrdU-Elisa法检测细胞增殖活力,并检测细胞超氧化物歧化酶(SOD)活性及氧化型谷胱甘肽/总谷胱甘肽(GSSG/T-GSH)水平以评估细胞氧化应激水平。结果:成功构建KD1～3及NCKD慢病毒载体,感染SRA01/04细胞效率约80%。三种慢病毒载体(KD1～3)敲减效率分别为93%、60%、74%,故选择KD1慢病毒载体进行后续实验。高钙状态下,KD1组细胞相对增殖活力和SOD活力[(2.42±0.08)和(11.69±0.52U/mg)]均低于NCKD组[(2.95±0...

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