CRISPR/Cas9技术介导兔先天性白内障疾病模型构建及表征分析

发布时间：2023-04-29 03:59

　　先天性白内障是一种严重的致盲性眼病,是导致儿童失明的主要原因。据临床数据显示,约1/3的先天性白内障与遗传有关,且主要为常染色体显性遗传。晶状体蛋白和缝隙连接蛋白的异常表达均可引发先天性白内障。因此,本课题选择晶状体蛋白CRYAA基因和缝隙连接蛋白GJA8基因进行研究。其中由CRYAA基因编码的αA晶状体蛋白占晶状体蛋白的40%,在防止蛋白错误聚集方面起到重要作用。GJA8编码的Cx50蛋白主要功能为形成缝隙连接通道,使纤维细胞间代谢产物及水等物质交换,以维持晶状体发育及透明。不同的致病基因突变可能引起不同白内障症状并具有不同分子细胞发病机制,因此,明确白内障发病机理对于进行白内障相关治疗极为重要。鉴于兔眼睛大小与人类之间的相似性,我们选择兔作为人眼病模型。CRISPR/Cas9系统作为一种能够对基因组进行精准高效切割的新型基因编辑技术,具有设计周期短、实验费用低和打靶效率高等优点。因此,本课题利用CRISPR/Cas9技术,对兔CRYAA基因和GJA8基因进行靶向修饰,构建先天性白内障模型并进行表征分析。在本实验中,根据兔全基因组数据库提供的CRYAA及GJA8基因序列,针对这两个基...

【文章页数】：108 页

【学位级别】：博士

【文章目录】：
摘要
abstract
英文缩略词表
引言
第一篇 综述
    第1章 基因编辑技术研究进展
        1.1 传统基因打靶技术
        1.2 锌指核酸酶技术（ZFNs）
        1.3 转录激活物效应核酸酶 (TALENs）技术
        1.4 CRISPR/Cas9技术
    第2章 晶状体及白内障研究进展
        2.1 晶状体概述
        2.2 白内障研究进展
    第3章 晶状体蛋白基因及缝隙连接蛋白基因研究进展
        3.1 晶状体蛋白研究现状
        3.2 缝隙连接蛋白研究现状
第二篇 研究内容
    第1章 pUC57-sgRNA载体构建及Cas9与sgRNA mRNAs的制备
        1.1 实验材料与方法
        1.2 实验方法
        1.3 实验结果
        1.4 讨论
        1.5 小结
    第2章 利用CRISPR/Cas9技术敲除CRYAA基因构建兔先天性白内障模型
        2.1 实验材料与方法
        2.2 实验方法
        2.3 实验结果
        2.4 讨论
        2.5 小结
    第3章 利用CRISPR/Cas9技术敲除GJA8基因构建兔先天性白内障模型
        3.1 实验材料与方法
        3.2 实验方法
        3.3 实验结果
        3.4 讨论
        3.5 小结
结论
参考文献
导师简介
作者简介及攻读博士期间所发表的论文
致谢



本文编号：3805121