TRIM21通过调控Ⅰ型干扰素和促炎性因子的分泌加重单纯疱疹性角膜上皮炎的研究

发布时间：2023-04-16 18:22

　　背景:单纯疱疹病毒Ⅰ型(herpes simplex virus-1,HSV-1)是一种噬神经组织的双链DNA病毒,人类是其唯一的自然宿主。流行病学显示,全球有50-90%的人携带HSV-1病毒。HSV-1感染角膜引起的角膜病,约50%-80%均表现为上皮性角膜炎。尽管HSV角膜上皮炎在一周之内即可自行消退,但如果没有适当的治疗,仍可能会进展为基质性角膜炎,导致进行性角膜混浊。迄今为止,关于HSV上皮性角膜炎的发病机制仍不明确。基于HSV-1感染特性,临床上常采用更昔洛韦等抗病毒药物作为治疗HSV角膜上皮炎的首选药物。然而长期使用抗病毒药物会导致病毒株的耐药性。因此,控制HSV-1感染仍然是一个巨大的挑战,目前迫切需要开发更有效的防御及治疗措施。三基序蛋白(Tripartite motif-containing proteins,TRIMs)家族是一类含有多个结构域的生物大分子,TRIMs蛋白家族成员众多,因其C-末端连接的不同结构域,发挥不同的功能作用。近期研究表明,C-末端的B30.2结构可以识别入侵的病毒,在病毒感染的过程中发挥至关重要的作用。TRIM21也称为Ro52或SS-A...

【文章页数】：96 页

【学位级别】：博士

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摘要
Abstract
英文缩略语
第一部分 :TRIM21在单纯疱疹性角膜上皮炎的异常表达
    1 前言
    2 材料和方法
        2.1 实验动物与细胞
        2.2 主要试剂及仪器
            2.2.1 主要试剂
            2.2.2 主要仪器与耗材
            2.2.3 主要配制试剂
        2.3 实验方法
            2.3.1 Vero细胞培养
            2.3.2 细胞计数
            2.3.3 HSV-1病毒激活与保存
            2.3.4 TCID₅₀法病毒滴定测定
            2.3.5 小鼠单纯疱疹性角膜上皮炎模型建立
            2.3.6 确定角膜成功感染病毒
            2.3.7 显微镜观察角膜病变程度
            2.3.8 小鼠角膜组织病理学检查
            2.3.9 免疫荧光法检测小鼠角膜TRIM21的表达
            2.3.10 Western Blotting法检测小鼠角膜TRIM21 的表达
        2.4 统计学分析
    3 结果
        3.1 病毒滴度测定
        3.2 小鼠单纯疱疹性角膜上皮炎模型鉴定
            3.2.1 Vero细胞培养检测泪液膜中病毒复制情况
            3.2.2 HE染色明确角膜组织病理学改变
        3.3 Western Blotting法检测HSV-1 感染小鼠角膜后TRIM21 的表达
        3.4 免疫荧光法检测HSV-1 感染小鼠角膜后TRIM21 的定位
    4 讨论
第二部分 :沉默TRIM21对小鼠单纯疱疹性角膜上皮炎的影响及机制探索
    1 前言
    2 材料和方法
        2.1 实验动物与细胞
        2.2 主要试剂及仪器
            2.2.1 主要试剂
            2.2.2 主要仪器与耗材
            2.2.3 主要配制试剂
            2.2.4 引物序列
        2.3 实验方法
            2.3.1 Vero细胞培养
            2.3.2 细胞计数
            2.3.3 HSV-1病毒激活与保存
            2.3.4 TCID₅₀法病毒滴定测定
            2.3.5 小鼠单纯疱疹性角膜上皮炎模型建立
            2.3.6 确定角膜成功感染病毒
            2.3.7 显微镜观察角膜病变程度
            2.3.8 小鼠角膜组织病理学检查
            2.3.9 Western Blotting检测方法
            2.3.10 qPCR检测方法
            2.3.11 ELISA检测方法
        2.4 统计学分析
    3 结果
        3.1 蛋白质及m RNA水平验证siRNA在小鼠角膜上的沉默效果
        3.2 各组小鼠的临床观察及评分
        3.3 HE染色明确各组小鼠角膜组织病理学改变
        3.4 沉默TRIM21对角膜泪液膜中病毒复制的影响
        3.5 沉默TRIM21对促炎细胞因子的影响
    4 讨论
第三部分 :TRIM21 通过削弱STING/IRF3 信号通路加重HSV-1 在人角膜上皮细胞中的感染
    1 前言
    2 材料和方法
        2.1 实验细胞
        2.2 主要试剂及仪器
            2.2.1 主要试剂
            2.2.2 主要仪器与耗材
            2.2.3 主要配制试剂
        2.3 实验方法
            2.3.1 Vero细胞培养及HSV-1 病毒滴定检测
            2.3.2 HCE细胞培养
            2.3.3 细胞计数
            2.3.4 HCE细胞转染TRIM21 的小干扰RNA及高表达TRIM21 的慢病毒质粒
            2.3.5 Western Blotting检测方法
            2.3.6 qPCR检测方法
        2.4 统计学分析
    3 结果
        3.1 蛋白质及mRNA水平验证在HCE细胞上TRIM21 的干扰效果
        3.2 干扰TRIM21表达对I型干扰素释放量的影响
        3.3 干扰TRIM21 表达对STING/IRF3 信号通路相关蛋白表达的影响
    4 讨论
结论
本研究创新性自我评价
参考文献
综述
    参考文献
攻读学位期间取得的研究成果
致谢
个人简历



本文编号：3791619