基于Nrf2/ARE信号通道研究槲皮素磷脂复合物对氧化损伤视网膜色素上皮细胞的保护作用

发布时间：2023-03-19 05:02

　　目的：合成槲皮素磷脂复合物,以ARPE-19为研究对象,比较槲皮素及其磷脂复合物对t-BHP诱导ARPE-19细胞氧化损伤的保护作用；观察槲皮素及其磷脂复合物对Nrf2/ARE信号通道及下游Ⅱ相解毒酶和抗氧化酶的调控作用,阐明槲皮素保护氧化损伤细胞的机制。方法：采用溶剂法制备复合物,差示扫描量热分析、红外光谱分析、X-射线衍射分析进行表征；测定单体及其复合物在水／氯仿中的溶解度。用t-BHP诱导ARPE-19细胞氧化损伤,MTT、AnnexinV-FITC/PI检测槲皮素及其磷脂复合物对细胞存活率、凋亡率的影响。将ARPE-19细胞分成：溶媒对照组(DMSO)、氧化损伤组、Nrf2 siRNA组、药物干预组、Nrf2siRNA+药物干预组,荧光定量PCR检测各组ARPE-19细胞Nrf2、HO-1、NQO-1、GCL、mRNA转录,Western blot检测各组ARPE-19细胞核内Nrf2、胞质Nrf2、HO-1、NQO-1、GCL蛋白表达,分别用二氯荧光黄法、化学比色法、黄嘌呤氧化酶法和硫化巴比妥酸法测定细胞内ROS、T-AOC.SOD、MDA含量。结果：差示扫描量热分析、红外光...

【文章页数】：52 页

【学位级别】：硕士

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摘要
Abstract
前言
第一篇 理论部分
    1. 中医对AMD的认识
        1.1 病名溯源
        1.2 病因病机
        1.3 证侯特征
        1.4 中医治疗
    2. 西医对AMD的认识
        2.1 临床特征及分类
        2.2 病因
        2.3 发病机制
        2.4 治疗
    3. 槲皮素及其磷脂复合物的相关研究
        3.1 分子结构
        3.2 生物活性
    4. 本研究的目的和意义
第二篇 槲皮素磷脂复合物的合成及表征
    实验材料
        1. 主要仪器及试剂
    实验方法
        1. 磷脂复合物的制备
        2. 磷脂复合物的结构鉴定
        3. 磷脂复合物溶解度测定
    结果
        1. 差示扫描量热分析
        2. 红外光谱分析
        3. X-射线衍射分析
        4. 槲皮素溶解度测定
    讨论
    结论
第三篇 槲皮素及其磷脂复合物对氧化损伤ARPE-19细胞的保护作用
    实验材料
        1. 实验细胞
        2. 主要仪器及设备
        3. 药物及试剂
    实验方法
        1. 主要试剂的配备
        2. 细胞的培养、传代、冻存和复苏
        3. ARPE-19细胞氧化损伤模型建立
        4. MTT检测槲皮素及其磷脂复合物对ARPE-19细胞的毒性
        5. MTT检测槲皮素及其磷脂复合物对t-BHP诱导的ARPE-19细胞存活率的影响
        6. AnnexinV-FITC/PI检测槲皮素及其磷脂复合物对t-BHP诱导的ARPE-19细胞凋亡率的影响
    实验结果
        1. ARPE-19细胞氧化损伤模型建立
        2. 不同浓度槲皮素及其磷脂复合物对APRE-19细胞的毒性
        3. 槲皮素及其磷脂复合物对氧化损伤APRE-19细胞的存活率影响
        4. 槲皮素及其磷脂复合物对氧化损伤APRE-19细胞的凋亡率影响
        5. 槲皮素及其磷脂复合物对t-BHP诱导APRE-19细胞形态的影响
    讨论
    结论
第四篇 槲皮素及其磷脂复合物对t-BHP诱导ARPE-19细胞氧化损伤保护作用及机制研究
    实验材料
        1. 实验细胞
        2. 主要仪器及设备
        3. 药物及试剂
    实验方法
        1. 瞬时转染ARPE-19细胞
        2. Real time PCR在转录水平鉴定转染效率
        3. Western blot在翻译水平鉴定转染效率
        4. Real time PCR观察药物在转录水平对二相酶的诱导作用
        5. Western blot观察药物在翻译水平对二相酶的诱导作用
        6. 细胞内SOD活性及T-AOC、ROS、MDA含量检测
        7. 统计学方法
    实验结果
        1. ARPE-19细胞转染鉴定
        2. Real time PCR检测NRF2、HO-1、GCL、NQO-1的表达
        3. Western blot检测NRF2、HO-1、GCL、NQO-1蛋白的表达
        4. 细胞SOD活性及T-AOC、ROS、MDA含量检测
    讨论
全文总结
参考文献
附录
攻读硕士学位期间取得的研究成果
致谢



本文编号：3764610