不同浓度右美托咪定对软骨细胞诱导型一氧化氮合酶的作用研究

发布时间：2024-02-19 23:30

　　背景和目的骨性关节炎是全球最常见的慢性退行性关节疾病,可以导致疼痛及残疾,严重影响患者生活质量。软骨、软骨下骨、滑膜和全身炎症在骨性关节炎的发病机制中发挥重要作用。诱导型一氧化氮合酶(iNOS)及其合成的一氧化氮(NO)在骨性关节炎中通过促炎、促进软骨细胞凋亡和细胞外基质降解、抑制细胞外基质合成、加重滑膜炎从而发挥重要的作用。右美托咪定(Dex)是高选择性的α₂肾上腺素受体激动剂,在许多研究中发现有抗炎、抑制交感、器官保护、镇痛等作用。右美托咪定是否通过调节软骨细胞iNOS/NO的产生而在骨性关节炎中发挥作用有待充分阐明。在本研究中,我们研究了不同浓度右美托咪定(0.1μM、1μM、10μM)对骨性关节炎细胞模型中iNOS活性以及NO产量的影响。方法用重组大鼠IL-1β(10 ng/mL)刺激大鼠膝关节软骨细胞建立骨性关节炎细胞模型。用不同浓度右美托咪定(0.1、1、10μM)和等体积的生理盐水分别处理IL-1β诱导的软骨细胞。实验分为5组:(1)对照组(control),(2)IL-1β刺激组(M),(3)IL-1β刺激+低浓度(0.1μM)的右美托咪定(Dex...

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【学位级别】：硕士

【部分图文】：

图2：软骨细胞经阿利新蓝（PH2.5）染色后图片

263.2软骨细胞经阿利新蓝（PH2.5）染色后观察为鉴定所培育的细胞的表型，我们采用阿利新蓝对细胞进行染色，阿利新蓝是一种类铜酞花青共轭染料,呈中度碱性且带有阳离子，与酸性或阴离子底物（如羧基或硫酸根）结合,形成不溶性的复合物，呈现出蓝色。此外，pH值也可以影响染色性能，例如，....

图3：三种浓度的右美托咪定且孵育不同时间对软骨细胞增殖的影响

27种浓度的右美托咪定对软骨细胞无细胞毒性，可以安全用于后续实验。图3：三种浓度的右美托咪定且孵育不同时间对软骨细胞增殖的影响。培养的P2代软骨细胞使用不同浓度的右美托咪定（0.1、1、10μM）分别处理24小时、48小时、72小时，用CCK8检测细胞活性。NS:生理盐水组；DL....

图4：不同浓度右美托咪定对IL-1β刺激软骨细胞NO的影响

28的吸光度测定了硝酸盐的量，因为这部分不仅包含了NO直接产生的硝酸盐，而且也包括了由亚硝酸盐转变而来的那部分硝酸盐。因此，此法才能更加准确地反应所检测的NO释放水平。我们的结果显示IL-1β刺激软骨细胞，软骨细胞NO的释放明显增加，我们使用了不同浓度的右美托咪定与IL-1β共培....

图5：不同浓度右美托咪定对IL-1β刺激软骨细胞iNOS活性的影响

29定试剂盒。测定原理：iNOS催化L-精氨酸和分子氧，可以生成NO，与结构型一氧化氮合酶（eNOS和nNOS）合成NO不同，此反应不依赖于钙，NO可以进一步与亲核性物质合成有色化合物，该化合物可以在530nm波长处，测定其吸光度。根据吸光度的大小计算出iNOS的活性。我们的结果....

本文编号：3903493