GSK3β和FoxO1调控细胞抗病毒免疫反应的机制
发布时间：2024-03-23 07:55
天然免疫反应是宿主抵御病毒感染与入侵的第一道防线,宿主细胞受到病毒感染之后,病毒的核酸、复制中间体以及一些诱导产物,被细胞内的模式识别受体(pattern recognition receptors, PRRs)识别,诱导细胞表达干扰素(interferons, IFNs)等抗病毒分子,引起抗病毒天然免疫反应,例如RNA病毒在复制过程中产生大量的双链RNA (double-stranded RNA, dsRNA),被定位在细胞质中的模式识别受体RIG-I (retinoic acid-inducible gene I)所识别。RIG-I招募接头蛋白VISA (virus-induced signaling adaptor), VISA一方面能够招募下游接头蛋白MITA (mediator of IRF3activation),通过蛋白激酶TBK1磷酸化修饰转录因子IRF3, IRF3形成二聚体进入细胞核；另一方面,VISA与TRAF6相互作用,通过IKK复合物磷酸化修饰IκBα,导致其泛素化降解,释放出转录因子NF-κB, NF-κB转移到细胞核内。进入细胞核的IRF3和NF-κB分别...
【文章页数】：129 页
【学位级别】：博士
【文章目录】：
摘要
Abstract
第一章 研究背景
1 抗病毒天然免疫概述
1.1 天然免疫简介
1.2 I型干扰素及其相关转录因子的介绍
2 模式识别受体对病原相关分子模式的识别机制
2.1 Toll样受体(Toll-like receptor,TLR)
2.2 RIG-I样受体(RIG-I like receptor,RLR)
2.3 NOD样受体
2.4 DNA受体
3 RLRs以及TLRs介导的细胞信号转导
3.1 RLRs介导的细胞信号转导的转导机制
3.1.1 RLRs介导的IRF3的激活
3.1.2 RLRs介导的NF-κB的激活
3.2 TLRs介导的细胞信号转导的转导机制
3.2.1 TLRs介导的IRF3的激活
3.2.2 TLRs介导的NF-κB的激活
3.3 细胞抗病毒信号转导过程的调节机制
3.3.1 蛋白质修饰调控
3.3.2 信号复合物组装以及分子相互作用调控
第二章 实验材料与实验方法
1 实验材料
1.1 荧光素酶报告基因载体以及试剂盒
1.2 表达克隆载体
1.3 细胞与细胞培养相关材料
1.4 细胞因子以及病毒
1.5 抗体
1.6 其它试剂或者耗材
1.7 实验仪器和设备
2 实验方法
2.1 RNAi载体和表达克隆载体的构建
2.2 荧光素酶报告基因实验
2.3 免疫共沉淀以及Western Blotting实验
2.4 细胞核细胞质分离
2.5 细胞器分离
2.6 RNA的提取及反转录PCR实验
2.7 空斑实验
2.8 泛素化修饰实验
2.9 免疫荧光共聚焦显微观察实验
2.10 非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳
2.11 ELISA检测
2.12 逆转录病毒建立稳定表达细胞系
2.13 凝胶过滤层析实验
第三章 GSK3β在细胞抗病毒天然免疫反应中的调控机制研究
1 研究背景与立项依据
2 实验结果
2.1 GSK3β促进病毒诱导转录因子IRF3的激活和IFNB1基因的转录
2.2 GSK3β表达的下调抑制病毒诱导的IRF3激活和IFNB1基因转录
2.3 Gsk3b-/-的MEFs中病毒诱导的IRF3激活和IFN-β表达显著降低
2.4 GSK3β在TBK1水平调控病毒诱导的IRF3激活和IFN-β产生
2.5 GSK3β促进TBK1的寡聚化和自身磷酸化
2.6 TBK1 S172自身磷酸化对IRF3的激活和IFN-β的表达是必需的
2.7 GSK3β表达的下调抑制病毒诱导的NF-κB激活
3 小结和讨论
第四章 FoxO1负调控细胞抗病毒天然免疫的机制研究
1 研究背景与立项依据
2 实验结果
2.1 筛选调控病毒诱导IFN-β启动子激活的分子
2.2 过量表达FoxO1能够抑制病毒诱导的IFN-β表达
2.3 下调FoxO1的表达能够促进病毒诱导的IFN-β表达
2.4 FoxO1在IRF3水平调控IFN-β的表达
2.5 病毒感染诱导FoxO1与IRF3的相互作用
2.6 FoxO1能够介导IRF3的降解
2.7 FoXO1能够促进IRF3 K48连接的多聚泛素化修饰
3 小结和讨论
第五章 研究总结和展望
参考文献
缩略词表
作者简历
读博期间发表论文
致谢
本文编号：3935615
【文章页数】：129 页
【学位级别】：博士
【文章目录】：
摘要
Abstract
第一章 研究背景
1 抗病毒天然免疫概述
1.1 天然免疫简介
1.2 I型干扰素及其相关转录因子的介绍
2 模式识别受体对病原相关分子模式的识别机制
2.1 Toll样受体(Toll-like receptor,TLR)
2.2 RIG-I样受体(RIG-I like receptor,RLR)
2.3 NOD样受体
2.4 DNA受体
3 RLRs以及TLRs介导的细胞信号转导
3.1 RLRs介导的细胞信号转导的转导机制
3.1.1 RLRs介导的IRF3的激活
3.1.2 RLRs介导的NF-κB的激活
3.2 TLRs介导的细胞信号转导的转导机制
3.2.1 TLRs介导的IRF3的激活
3.2.2 TLRs介导的NF-κB的激活
3.3 细胞抗病毒信号转导过程的调节机制
3.3.1 蛋白质修饰调控
3.3.2 信号复合物组装以及分子相互作用调控
第二章 实验材料与实验方法
1 实验材料
1.1 荧光素酶报告基因载体以及试剂盒
1.2 表达克隆载体
1.3 细胞与细胞培养相关材料
1.4 细胞因子以及病毒
1.5 抗体
1.6 其它试剂或者耗材
1.7 实验仪器和设备
2 实验方法
2.1 RNAi载体和表达克隆载体的构建
2.2 荧光素酶报告基因实验
2.3 免疫共沉淀以及Western Blotting实验
2.4 细胞核细胞质分离
2.5 细胞器分离
2.6 RNA的提取及反转录PCR实验
2.7 空斑实验
2.8 泛素化修饰实验
2.9 免疫荧光共聚焦显微观察实验
2.10 非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳
2.11 ELISA检测
2.12 逆转录病毒建立稳定表达细胞系
2.13 凝胶过滤层析实验
第三章 GSK3β在细胞抗病毒天然免疫反应中的调控机制研究
1 研究背景与立项依据
2 实验结果
2.1 GSK3β促进病毒诱导转录因子IRF3的激活和IFNB1基因的转录
2.2 GSK3β表达的下调抑制病毒诱导的IRF3激活和IFNB1基因转录
2.3 Gsk3b-/-的MEFs中病毒诱导的IRF3激活和IFN-β表达显著降低
2.4 GSK3β在TBK1水平调控病毒诱导的IRF3激活和IFN-β产生
2.5 GSK3β促进TBK1的寡聚化和自身磷酸化
2.6 TBK1 S172自身磷酸化对IRF3的激活和IFN-β的表达是必需的
2.7 GSK3β表达的下调抑制病毒诱导的NF-κB激活
3 小结和讨论
第四章 FoxO1负调控细胞抗病毒天然免疫的机制研究
1 研究背景与立项依据
2 实验结果
2.1 筛选调控病毒诱导IFN-β启动子激活的分子
2.2 过量表达FoxO1能够抑制病毒诱导的IFN-β表达
2.3 下调FoxO1的表达能够促进病毒诱导的IFN-β表达
2.4 FoxO1在IRF3水平调控IFN-β的表达
2.5 病毒感染诱导FoxO1与IRF3的相互作用
2.6 FoxO1能够介导IRF3的降解
2.7 FoXO1能够促进IRF3 K48连接的多聚泛素化修饰
3 小结和讨论
第五章 研究总结和展望
参考文献
缩略词表
作者简历
读博期间发表论文
致谢
本文编号：3935615
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