胶质瘤miR-29s表达异常减少对其DNMT3A/3B的影响及其机制研究

发布时间：2024-05-19 04:50

　　[目的]miR-29包括miR-29b和miR-29c三个亚型。近来的研究表明,这三种微小RNA (miRNA)均是抑瘤miRNA (TS-miRNA),其低表达是一些颅外恶性肿瘤发生、发展的重要因素。而胶质瘤细胞有无miR-29a、 miR-29c表达异常减少,它们表达异常减少与胶质瘤发生、发展的关系怎样,均尚不清楚。在哺乳动物细胞中,DNA甲基转移酶3A/3B (DNMT3A、 DNMT3B)是重要的DNA甲基转移酶,可通过催化DNA特定区段从头甲基化参与表观遗传学调控,其过表达可引起重要抑瘤基因启动子区甲基化,由此引起的抑瘤基因表达下调可导致肿瘤发生。有线索显示,在颅外恶性肿瘤细胞中miR-29a、miR-29b、miR-29c均可特异性敲低DNMT3A和DNMT3B的表达：但二者在胶质瘤细胞中的调控关系如何,以及miR-29a、miR-29b、miR-29c低表达或缺失对胶质瘤细胞DNMT3A和DNMT3B表达有无影响,尚有待进一步探讨。我们以人胶质瘤组织标本和人非肿瘤对照脑组织标本及U87MG和U251胶质母细胞瘤细胞系为研究对象,通过检测分析miR-29各亚型在不同级别胶质...

【文章页数】：66 页

【学位级别】：硕士

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中文摘要
Abstract
缩略语府号说明
前言
    研究现状、成果
    研究目的、方法
材料与方法
    1. 主要实验仪器
    2. 实验材料
        2.1 组织标本
        2.2 人胶质瘤细胞系和培养基
        2.3 原位杂交探针、Mimics及PCR引物序列(见表2-5)
        2.4 主要试剂
    3. 实验方法
        3.1 组织微阵列原位杂交技术
        3.2 三种miR-29 Mimics转染效率的鉴定
        3.3 三种miR-29靶mRNA的生物信息学预测
        3.4 胶质瘤细胞中三种miR-29靶mRNA的鉴定
        3.5 DNMT3A及DNMT3B mRNA的qRT-PCR检测
        3.6 DNMT3A和DNMT3B蛋白表达的Westernblot检测
        3.7 统计学方法
结果
    1. 对照组及各胶质瘤组三种miR-29表达水平的比较
    2. 转染Mimics可有效提高胶质瘤细胞三种miR-29的总含量
    3. 三种miR-29靶mRNA的生物信息学预测结果
    4. 胶质瘤细胞中三种miR-29靶mRNA的鉴定
        4.1 重组荧光素酶表达质粒的提取与鉴定
        4.2 各组U87MG及U251细胞荧光素酶活性检测结果
    5. miR-29家族调控胶质瘤细胞DNMT3A及DNMT3B表达
        5.1 miR-29家族诱导胶质瘤细胞DNMT3A和DNMT3B mRNA降解
        5.2 miR-29家族下调胶质瘤细胞DNMT3A和DNMT3B蛋白表达
    6. miR-29抑制剂上调胶质瘤细胞DNMT3A和DNMT3B表达
        6.1 miR-29抑制剂上调DNMT3A和DNMT3B mRNA表达水平
        6.2 miR-29抑制剂上调DNMT3A和DNMT3B蛋白表达水平
讨论
    1. miR-29家族成员在胶质瘤细胞中表达异常降低
    2. 在胶质瘤细胞DNMT3A和DNMT3B均是miR-29家族的靶基因
    3. 在胶质瘤细胞miR-29家族可敲低DNMT3A或DNMT3B表达
    4. 抑制miR-29活性可上调胶质瘤细胞DNMT3A和DNMT3B表达
    5. 总结与展望
结论
参考文献
发表论文和参加科研情况说明
综述
    综述参考文献
致谢



本文编号：3977619