miRNA-451/MIF通路介导脑微血管损伤在帕金森病认知障碍发生中的作用及机制研究

发布时间：2024-03-04 23:38

　　目的:本研究旨在探讨miRNA-451/MIF及其下游信号通路在脑微血管损伤、血管形成、神经炎症及神经元自噬过程中的作用,阐明其在帕金森病(PD)认知障碍发生发展中的作用及机制。方法:采用ExoQuick从PD患者血浆中分离外泌体,分别用透射电镜、NanoSight纳米颗粒分析仪鉴定其形态学,Western blot检测外泌体标记蛋白CD9、CD63的表达,使用高通道测序检测外泌体miRNA的表达差异。利用液相芯片和ELISA法对PD患者脑脊液蛋白质进行鉴定,利用TBSS技术分析脑白质结构异常改变及模式,探讨PD认知障碍发生的脑结构改变及分子机制,并为其提供分子生物和影像学标志物。将培养的小鼠脑微血管内皮细胞(bend.3)分别转染miRNA-451和miRNA-451 inhibitor慢病毒以过表达或沉默miRNA-451,分别检测:(1)CCK-8增殖实验和平板克隆形成实验检测各组bend.3细胞增殖和克隆形成能力;(2)Transwell和划痕实验检测各组bend.3细胞的迁移能力;(3)管腔形成实验检测各组bend.3细胞血管形成能力;(4)Western blot检测各组b...

【文章页数】：173 页

【学位级别】：博士

【部分图文】：

图1目前己知的PD基巨，，Yaylpeu7wiirt

前言??ｇｅｎｅ，?ＧＢＡ）基因突变可能是ＰＤ发生的危险因素之一＿，这一系列发现提示了??ＰＤ的致病突变基因存在多样性（图１）?［２１＿２化??Ｌｏｃｕｓ?Ｃｈｒｏｍｏｓｏｍｅ?Ｇｅｎｅ?Ｉｎｈｅｒｉｔａｎｃｅ?—??ＰＡＲＫｌ?４ｑ?ＳＮＣＡ?（ｐｏｉｎｔ?ｍｕｔａｔｉｏｎ）?....

图３神经退行性疾病血脑屏障损伤示意图??Ｆｉｇ?３?Ｂｌｏｏｄ－ｂｒａｉｎ?ｂａｒｒｉｅｒ?ｂｒｅａｋｄｏｗｎ?ｉｎ?ｎｅｕｒｏｄｅｇｅｎｅｒａｔｉｖｅ?ｄｉｓｏｒｄｅｒ??

②Ｐ－ｇｐ蛋白与中国人群ＭＤＲ１基因多态性研宄有关，且ＭＤＲ１基因??的某些多态性对于ＰＤ可能具有保护作用。由此可见，血流低灌注过程中损伤涉??及了微血管－神经元及血脑屏障的稳态平衡的破坏。如图３所示，??Ｐｅｒｉｃｙｌｅ??—ｉ??Ｂａｓｅｍｅｎｔ?＇?＾?１??ｔｎｅｍｂｒａ....

图3.1血浆外泌体粒径和浓度分析

病程?一?１０?１??ＵＰＤＲＳ－ＩＩＩ?—?１６?２７??Ｈ－Ｙ?分级?一?Ｌ５?１．５??ＭＭＳＥ?２５?３０?２８??ＭｏＣＡ?１６?２９?２７??ＨＡＭＡ?１８?６?３??ＨＡＭＤ?１８?２?３??高血压?无无?无??糖尿病?无无无??ＢＭＩ?２２Ａ?１９Ａ?２７．５??....

图３．２外泌体表面标志物和形态学特征

四旋蛋白是常见的外泌体特异性标志物，主要包括ＣＤ９，?ＣＤ６３和ＣＤ８１。??本研究采用Ｗｅｓｔｅｒｎ?ｂｌｏｔ方法检测外泌体标记蛋白ＣＤ９，ＣＤ６３的表达情况，发??现提取外泌体表达ＣＤ９和ＣＤ６３?（见图３．２Ａ）。??３．５透射电镜鉴定外泌体形态??透射电镜下观察到外周血外....

本文编号：3919345