基于Hv1基因敲除调控小胶质细胞自噬对中枢神经脱髓鞘的影响

发布时间：2024-02-23 19:37

　　【目的】中枢神经系统脱髓鞘疾病是以脑和脊髓髓鞘缺失为主要病理特征的一组疾病,目前研究认为,中枢神经脱髓鞘与机体免疫系统有密切的联系。小胶质细胞是定植于中枢神经系统内的免疫细胞,在中枢神经脱髓鞘的病理过程中起到了十分重要的作用。Hv1是表达于细胞膜上的一种电压门控质子通道,在中枢神经系统内高表达于小胶质细胞上^[1]。本研究拟以质子通道Hv1为靶点,研究敲除Hv1基因后质子通道Hv1缺失导致小胶质细胞自噬的变化,及其在中枢神经脱髓鞘中的影响。【方法】实验将溶血卵磷脂(lysophosphatidylcholine,LPC)定位定量注射于Hv1基因敲除(Hv1^-/-)和野生型(WT)小鼠一侧胼胝体建立中枢神经脱髓鞘模型,两种小鼠均设置Sham组、造模后5天、10天、28天组,通过LFB染色观察两组小鼠髓鞘脱失情况,并通过免疫印迹Western Blot检测、免疫荧光染色对比两组小鼠自噬指标的变化,通过电镜观察两组小鼠髓鞘脱失情况及自噬小体的生成情况。上述实验结果通过统计分析后,对比Hv1^-/-组与WT组在脱髓鞘严重程度、自噬指...

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【学位级别】：硕士

【部分图文】：

图1.LFB染色示髓鞘脱失情况

第三章实验结果15第三章实验结果3.1Hv1基因敲除改善脱髓鞘分别对Sham组、造模后5天、10天、28天组的WT、Hv1-/-小鼠脑组织切片进行LFB染色观察小鼠胼胝体区髓鞘脱失情况。对髓鞘脱失情况评级依据下列标准：0级：髓鞘形态正常；1级：髓鞘纤维紊乱；2级：髓鞘内有空泡形成....

图2.westernblot、免疫荧光染色显示两组小鼠自噬的动态变化

南华大学硕士学位论文16鼠分别取脑，并提取蛋白进行westernblot检测。结果显示，与Sham组相比，手术后WT组小鼠LC3II/LC3I值明显上调，5天时间点时最高；与WT组相比，5天、10天、28天时Hv1-/-组LC3II/LC3I值均下调（图2，A、B），其中5天时间....

图3.电镜显示髓鞘结构细微改变

南华大学硕士学位论文18图3.电镜显示髓鞘结构细微改变。A：造模后10天WT组、Hv1-/-组胼胝体损伤部位自噬小体生成情况，可见小胶质细胞内有自噬小体生成（绿色箭头所指）,Scalebar=1um；B：造模后10天WT组、Hv1-/-组胼胝体损伤部位髓鞘脱失情况，Scaleba....

本文编号：3907867