利用单细胞层层组装技术构建3D缺氧微环境研究miR-382和细胞自噬在肾纤维化中的作用

发布时间：2024-01-30 00:53

　　研究背景肾纤维化,包括肾小球硬化和肾小管间质纤维化,是慢性肾脏病的普遍特征。许多病理因素,例如慢性持续感染,缺氧,控制不佳的高血压和糖尿病等,均可以引发进行性和不可逆的肾纤维化。其中糖尿病肾病(DN)主要表现为肾小球硬化,其发病机制目前尚不完全明确。高血糖、遗传背景、血流动力学异常等因素均能引起代谢改变、血管活性物质异常,无法精确解析肾纤维化的发生发展过程。因此,积极探索肾纤维化的相关发病机制,并据此研发新的治疗策略一直是研究者努力的目标与方向,其中,缺氧被认为是一个关键因素。最近的研究已经强调了肾内低氧作为慢性肾脏疾病的一个潜在机制。本研究采用单细胞层层组装技术(LBL)成功地构建了体外3D缺氧微环境,以研究miR-382和细胞自噬在肾纤维化中的作用。目的1、基于单细胞LBL技术平台,构建肾系膜细胞的3D缺氧微环境培养体系。2、明确缺氧微环境对肾系膜细胞miR-382以及相关信号通路的影响。3、明确miR-382诱导肾纤维化的相关机制。内容和方法1、利用单细胞LBL组织工程手段构建肾系膜细胞的3D缺氧微环境培养体系。2、采用qRT-PCR法和免疫荧光分析比较研究在2D、3D培养条件下...

【文章页数】：66 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
ABSTRACT
前言
第一章 利用单细胞LBL组装技术构建3D缺氧微环境
    引言
    1 实验设备与试剂
        1.1 实验设备
        1.2 实验主要试剂
        1.3 实验中相关溶液的配制
    2 实验方法和步骤
        2.1 单纯2D细胞和3D RMCs细胞球的培养
        2.2 肾组织工程LBL材料的制备和3D缺氧微环境的构建
        2.3 HA-EDA和HA材料的结构表征和细胞毒性检测
        2.4 透射电镜观察3D RMCs球体细胞结构的变化
    3 实验结果
        3.1 HA-EDA材料和多细胞RMCs球体的表征
        3.2 单细胞LBL组装后3D RMCs球体的形成
    4 讨论
    5 结论
第二章 利用单细胞LBL组装技术构建3D缺氧微环境研究miR-382和细胞自噬在肾纤维化中的作用
    引言
    1 实验设备与试剂
        1.1 实验设备
        1.2 实验试剂
        1.3 实验相关溶液的配制
    2 实验方法和步骤
        2.1 免疫荧光染色和共聚焦激光扫描显微镜观察
        2.2 蛋白质的提取
        2.3 Western blot实验步骤
        2.4 qRT-PCR实验方法
        2.5 流式分析
        2.6 胞浆和胞核蛋白及全蛋白的提取
    3 实验结果
        3.1 3D RMCs球体缺氧微环境促使miR-382高表达和PTEN的低表达
        3.2 3D RMCs球体缺氧微环境促使TGF-β1和Fn基因高水平表达
        3.3 3DM细胞逃离3D RMCs球体的缺氧微环境,形成CD24阳性细胞
    4 讨论
    5 结论
中英文对照缩略词表
全文小结
参考文献
攻读硕士学位期间的研究成果
致谢



本文编号：3889175