bFGF基因转染对羊骨髓间充质干细胞成骨调节作用的研究

发布时间：2024-03-02 09:19

　　目的：观察全骨髓培养法和密度梯度离心法两种不同分离方法对羊的骨髓间充质干细胞生物活性的影响，对其中生物活性较好的一组进行成骨方向的诱导培养，了解骨髓间充质干细胞向成骨细胞分化过程中成骨相关基因动态表达模式。方法：分别采用全骨髓培养法和密度梯度离心法提取羊骨髓间充质干细胞，流式细胞仪检测CD44抗原表达，Von Kossa’s染色，碱性磷酸酶染色检测成骨诱导的分化潜能。选择其中较好的一种分离方法培养的BMSCs，用普通培养基和矿化诱导培养基分别培养。实时荧光定量PCR检测两组BMSCs成骨相关基因表达量的变化。构建携带人bFGF基因的慢病毒载体和GFP基因的慢病毒载体，收集GFP-慢病毒、bFGF-慢病毒上清转染诱导后第4代的羊骨髓间充质干细胞。流式细胞仪检测BMSCs的转染率。用实时荧光定量PCR检测转染与非转染的BMSCs成骨相关基因的表达量的变化。结果：全骨髓培养法培养的BMSCs的CD44阳性率为87.6%，密度梯度离心法的为83.4%，CD44阳性率的差异无统计学意义(P>0.05)。经成骨诱导培养后第3代BMSCs，Von Kossa’s法矿化结节染色和碱性磷酸酶染色为...

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【学位级别】：硕士

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摘要
Abstract
前言
研究内容与方法
    1 实验材料及仪器
        1.1 实验材料
        1.2 实验仪器
    2 实验内容
        2.1 羊的骨髓间充质干细胞的培养
        2.2 羊骨髓间充质干细胞的成骨诱导培养
        2.3 慢病毒载体构建
        2.4 慢病毒感染羊 BMSC
    3 质量控制
    4 统计学方法
结果
附技术路线图
讨论
小结
致谢
参考文献
综述
    参考文献
攻读学位期间撰写和发表的论文
导师评阅表



本文编号：3916658