载BMP-2基因PLGA微球的制备及在体内外成骨作用的研究

发布时间：2024-02-27 23:55

　　各种原因引起的牙槽骨吸收萎缩是口腔医学领域最常见的临床表现之一，不仅影响颜面美观，咀嚼、发音和进食功能以及后续的义齿修复，还严重影响患者的身心健康。目前存在的治疗牙槽骨吸收和萎缩的方法有：自体或异体骨移植、骨替代物移植、干细胞组织工程骨以及应用牵张成骨技术等。但是因为自体骨来源有限，异体骨移植可引起免疫排斥反应和其他疾病的风险；骨替代物移植和干细胞组织工程骨成骨能力有限；牵张成骨技术价格昂贵、技术复杂等问题，因此希望寻找一种安全、有效、简便、易行的方法来治疗牙槽骨的吸收萎缩。 目前，应用骨形成蛋白（BMP）促进萎缩的牙槽骨成骨能力已经取得了一定的进展，但是由于体内应用其半衰期短、需要应用毫克量甚至更多量才能实现其促进骨形成的作用，致使价格昂贵。转基因治疗骨再生是借助转基因技术，利用外源基因在自体细胞内表达并分泌骨形成蛋白达到治疗骨破坏性疾病的目的。研究表明，通过转染骨折部位的细胞，使其分泌内源性BMP促进骨再生效果要好于直接应用外源性重组蛋白。因此，转基因治疗促进骨形成将是一种趋势并在临床治疗中发挥重要作用。 传统的给药方式是利用病毒载体通过注射给药，缺陷是存在生物安全隐患，并且需要多...

【文章页数】：68 页

【学位级别】：博士

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中文摘要
Abstract
引言
第1章 文献综述
    1.颌骨吸收和损伤的治疗方法
        1.1 骨或骨替代物移植治疗颌骨吸收和损伤
        1.2 应用化学药物治疗颌骨吸收和损伤
        1.3 牵张成骨技术治疗颌骨吸收和损伤
        1.4 干细胞组织工程学治疗颌骨吸收和损伤
        1.5 转基因技术治疗颌骨吸收和损伤
    2.基因复合物的转运体系
        2.1 微粒
        2.2 合成微粒的材料
        2.3 PLGA 微粒在运输药物或生长因子中的应用
        2.4 PLGA 微粒在 BMP-2 蛋白运输中的应用
    3.本研究的思路
第2章 载 BMP-2 基因 PLGA 微球的制备与表征
    2.1 材料和仪器
    2.2 实验方法
        2.2.1 溶液配制
        2.2.2 PLGA 微球的制备
        2.2.3 PLGA 微球形态学观察
        2.2.4 包封率、载药率的测定
        2.2.5 微球 DNA 体外释放，微球降解形貌
    2.3 结果
        2.3.1 不同条件所制备微球的性能
        2.3.2 微球的表面形态
        2.3.3 微球 PBMP-2 基因体外释放
        2.3.4 微球的体外降解实验
    2.4 讨论
第3章 载 CAPI/DNA 复合物 PLGA 微球的表征在体内异位成骨的研究
    3.1 实验主要仪器和试剂
    3.2 实验方法
        3.2.1 载 EGFP 基因和 BMP-2 基因 PLGA 微球（PLGA@CAPI/DNA）的制备
        3.2.2 PLGA@CAPI/DNA 的表征（TEM）
        3.2.3 体外研究 PLGA@CAPI/EGFP 对 MC3T3-E1 细胞的作用
        3.2.4 体内动物实验研究 PLGA@CAPI/PBMP-2 在大鼠肌囊异位成骨的作用
    3.3 结果
        3.3.1 CAPI/DNA 复合物的粒径与尺寸
        3.3.2 TEM 检测
        3.3.3 PLGA@CAPI/EGFP 体外转细胞实验
        3.3.4 体内异位成骨实验结果
    3.4 讨论
    结语
第4章 载 PEI/DNA 复合物的 PLGA 微球的制备与表征
    4.1 实验主要仪器及试剂
    4.2 实验方法
        4.2.1 载 PEI/DNA 复合物的 PLGA 微球的制备与表征
        4.2.2 PLGA@PEI/PBMP-2/FITC 微球转染 MC3T3-E1 细胞的实验研究
    4.3 结果
        4.3.1 PLGA@PEI/PBMP-2/FITC 的形貌分析
        4.3.2 载 PEI/DNA/FITC 复合物 PLGA 微球和 MC3T3 细胞共培养结果
    4.4 讨论
第5章 PLGA@PEI/BMP-2 在体内外成骨作用的研究
    5.1 实验主要仪器及试剂
    5.2 实验方法
        5.2.1 ELISA 检测共培养后人 BMP-2 分泌量
        5.2.2 PLGA @PEI/PBMP-2 对 MC3T3-E1 细胞分化的作用
        5.2.3 PLGA@PEI/PBMP-2 对大鼠颅盖骨缺损修复的影响
        5.2.4 统计学分析
    5.3 结果
        5.3.1 ELISA 结果
        5.3.2 茜素红染色结果和 RT-QPCR 结果
        5.3.3 明胶海绵复合载基因 PLGA 微球
        5.3.4 大鼠颅盖骨缺损模型
        5.3.5 MICRO-CT 结果
        5.3.6 组织学分析
    5.4 讨论
第6章 结论
参考文献
作者简介及在学期间取得的科研成果
致谢



本文编号：3913160