microRNA-7调控轮状病毒NSP5与宿主IGF1抑制病毒复制的作用机制研究

发布时间：2024-03-24 01:56

　　轮状病毒(Rotavirus,RV)属呼肠孤病毒科,轮状病毒属,基因组由11段分节段RNA组成,分别编码6种结构蛋白(VP1-4,6,7)和6种非结构蛋白(NSP1-6),分别在RV的吸附、侵入、复制、装配和释放等环节中发挥着重要作用。RV的感染可引起宿主细胞内多种成分的异常表达,其中就有miRNAs。作为非编码的小RNA,其在组织和器官的生长发育、新陈代谢、疾病发生及病原体侵染等多种领域中所参与的调控机制一直是人们研究和讨论的热点。在预实验中我们对感染RV的MA104细胞进行了 miRNAs表达谱分析,发现miR-7的表达水平显著上调,因此我们将miR-7列为探究RV复制调控机制的研究对象。目的:本论文旨在探究RV感染过程中miR-7的作用,调控的靶基因、调控RV复制的机制和参与的信号通路等。方法:在确认miR-7为研究对象后,首先我们在体外(MA104细胞)和体内(Balb/c乳鼠模型),通过过表达/抑制miR-7,检测miR-7对RV复制的作用。针对病毒基因,我们通过数据库分析预测和双荧光素酶报告实验确认RV的NSP5基因为miR-7靶基因,进一步通过共转染pEGFP-N2-NS...

【文章页数】：68 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

图２．感染ＲＶ前后的ｍｉＲＮＡｓ表达谱分析??Ｆｉｇ．?２．?Ａｎａｌｙｓｉｓ?ｏｆ?ｍｉＲＮＡｓ?ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ?ｐｒｏｆｉｌｅｓ?ｂｅｆｏｒｅ?ａｎｄ?ａｆｔｅｒ?ＲＶ?ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ??

１．１我们ＲＶＺＴＲ－６８株（Ｇ１Ｐ［８］）感染前后的ＭＡ１０４细胞进行ｍｉＲＮＡｓ的表达??谱差异分析，结果发现感染ＲＶ后，细胞内多种ｍｉＲＮＡｓ表达均出现上调的现象??（图２）。在后续的实验中，我们进一步发现ｍｉＲ－７在细胞感染轮状病毒后的上??调效果较为稳定，故选其作为探宄....

图４．?ＭＡＩ０４细胞感染不同基因型（ａ）及不同ＭＯＩ?（ｂ）?ＲＶ后的ｍｉＲ－７表达??

?中国医学科学院北京协和医学院硕士研宄生学位论文２、ＭＡ１０４细胞感染不同基因型（Ｇｌ，Ｇ２，Ｇ４，Ｇ９）及不同ＭＯＩ?（０．０５，?０．０．２，０．５，１）轮状病毒的ｍｉＲ－７表达水平??ＲＶ感染ＭＡ１０４细胞３６ｈ时ｍｉＲ－７的表达达到顶峰，因此我们分别用基因型及不同ＭＯＩ的....

图５．?ＨＴ－２９和Ｃａｃｏ－２细胞感染ＲＶ后的ｍｉＲ－７表达??Ｆｉ．?５．?ｍｉＲ－７?ｅｘｒｅｓｓｉｏｎ?ｏｆ?ＨＴ－２ａｎＣａｃｏ－２?ｃｅｌｌｓ?ａｆｔｅｒ?ＲＶ?ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ??

－Ｉ?〇??＊?ｍ?ｆｖｉＯＣＫ?ｇ－???Ｔ?Ｊ－?ＥＧ１?１??ｉ???圍＊?■ＥＧ９?ｒ??Ｌｌｉｓｌ?Ｉ：??ｏ＇＂?＆?〇?０．１?０．５?１?２??令０?ＭＯＩ??ａ?ｂ??Ｉ０４细胞感染不同基因型（ａ）及不同ＭＯＩ?（ｂ）?ＲＶ后的ｍＲ－７?ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ?ｉ....

图７．免疫荧光检测ＭＡ１０４细胞内ｍｉＲ－７上下调时ＲＶ的复制情况（左：蓝色为??ＤＡＰＩ、红色为ＲＶ；右：ＲＶ阳性细胞统计）??

（ＭＯＩ＝０．０５），并于种毒１２ｈ后进行免疫荧光实验来检测轮状病毒复制情况。??结果显示，细胞内ｍｉＲ－７表达的上调能够显著抑制病毒的复制且当下调ｍｉＲ－７??的表达时，ＲＶ的复制情况要高于对照组（图７）。通过免疫荧光（Ｇｏａｔ－ａｎｔｉ－ＲＶ），??我们可以很直观的确认ｍｉＲ....

本文编号：3936792