肌动蛋白相关蛋白2/3复合体在慢性阻塞性肺疾病小鼠肺泡巨噬细胞吞噬功能低下中的作用

发布时间：2024-02-14 14:10

　　背景及目的慢性阻塞性肺疾病(慢阻肺)小鼠肺泡巨噬细胞(AM)吞噬功能低下与AM细胞骨架的异常重排关系密切;肌动蛋白相关蛋白(Arp)2/3复合体可正性调节F-肌动蛋白导致细胞骨架重排,但慢阻肺AM吞噬功能低下与Arp2/3复合体调控F-肌动蛋白影响细胞骨架排列的研究较少,故本研究探讨在慢阻肺小鼠AM中,Arp2/3复合体在吞噬功能中的作用。方法采用单纯香烟烟雾暴露法建立慢阻肺模型,20只8周龄的SPF级BALB/c雄性小鼠进行模型建立,20只同样条件的小鼠为健康对照组,模型建成后采用EMMS动物肺功能仪测定其肺功能;处死小鼠,观察肺组织形态变化;分离AM,并将其分为健康对照组、慢阻肺组、健康CK666组、慢阻肺CK666组。噻唑兰比色法(MTT)测定CK666作用的最适浓度和时间,向健康CK666组和慢阻肺CK666组AM中加入10μmol/L CK666培养24 h;流式细胞术测AM吞噬异硫氰酸荧光素标记的大肠杆菌(FITC-E.coli)的能力;蛋白印迹法测定AM Arp2及F-肌动蛋白的表达;激光共聚焦显微镜测AM Arp2、F-肌动蛋白、吞噬的FITC-E.coli平均光密度及...

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【学位级别】：硕士

【部分图文】：

图1香烟烟雾暴露建立慢阻肺模型（A：早期B：晚期）

兰州大学硕士学位论文肌动蛋白相关蛋白2/3复合体在慢性阻塞性肺疾病小鼠肺泡巨噬细胞吞噬功能低下中的作用2实验方法2.1慢阻肺造模2.1.1单纯香烟烟雾暴露法建立慢阻肺小鼠模型沿用本团队建模方法建立慢阻肺小鼠模型[64]。将4只兰州牌香烟置于50cm30cm35....

图2蛋白浓度标准曲线

的细胞进行离心，洗涤一次；00μl的细胞裂解液，冰上裂解约30min；用移液器将细胞悬液转移至无菌EP管中，低度；煮沸变性后，在-20℃下储存。蛋白浓度工作液：根据试剂盒说明配制，置于室温备用白样品；样品加20μl到96孔板中；作液，培养30min后....

图3灌胶板2.6.4电泳

肌动蛋白相关蛋白2/3复合体在慢性阻塞性肺疾病小鼠肺泡巨噬细胞夹子将厚薄玻璃板固定在灌胶板上，用加样枪向两观察10min，如果没有泄漏，沿一侧缓慢倒出蒸馏水余水分；加入10%分离胶,再用三蒸水液封，待分离胶凝固后齿梳，待其凝固，密封保存。

图4电泳2.6.5转膜

图3灌胶板胶上的梳子，将其放入电泳槽中，拔掉梳子，上样，换用恒压（120V）电泳1h。

本文编号：3898186