猪巨细胞病毒环介导等温扩增检测方法的建立及其在流行病学调查中的应用
发布时间：2024-03-15 03:30
猪巨细胞病毒(Porcine cytomegalovirus, PCMV)可引起仔猪包涵体鼻炎,流产或者新生仔猪死亡。目前,该病毒已广泛存在于世界各地,其血清阳性率均可达90%以上。由于PCMV体外培养技术尚不成熟,对PCMV的研究相对较少,国外的研究主要集中在异种器官移植,研究表明,潜在的PCMV可在异种器官移植中被激活,并在此期间大量的繁殖,从而产生免疫抑制；在体外,PCMV的感染可激活内皮细胞而产生消耗性凝血障碍,但其在体内能否产生相应的作用还有待证实。环介导等温扩增检测方法(loop-mediated isothermal amplification, LAMP)是一种恒温核酸扩增方法,只需在恒温条件下保温几十分钟就可快速完成核酸的扩增,可用于病原的快速检测。本研究拟针对PCMVgB基因建立检测猪巨细胞病毒的LAMP方法,结果显示可用于新型PCMV检测试剂盒的研发,以期能够对PCMV进行快速、简便的检测。本研究还利用所建方法开展了对四川省多地区PCMV分子流行病学调查,调查结果对PCMV综合防控及净化与异种器官移植的选择等具有重要意义。本实验对PCMV gB基因进行了以下研究：...
【文章页数】：60 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
中文摘要
ABSTRACT
缩略词表
第一章 文献综述
1 PCMV
1.1 PCMV的概述
1.2 PCMV的病原学
1.3 PCMV的流行病学
1.4 PCMV的蛋白及其功能
1.5 PCMV的致病机理
1.6 PCMV的临床症状
1.7 PCMV的病理变化
1.8 PCMV的诊断技术
1.9 PCMV的防治
2 环介导等温扩增技术
2.1 LAMP的原理
2.2 LAMP的扩增特点
2.3 LAMP的不足与对策
2.4 LAMP的应用
3 研究的目的与意义
第二章 猪巨细胞病毒的环介导的等温扩增检测方法的建立
1 材料
1.1 实验材料
1.2 主要仪器
1.3 主要溶液及配制
2 实验方法
2.1 LAMP法引物设计及合成
2.2 LAMP法反应体系的优化
2.3 LAMP法反应条件的优化
2.4 LAMP法特异性试验
2.5 LAMP法敏感性试验
2.6 重复性和稳定性试验
3. 实验结果
3.1 LAMP法反应体系的优化结果
3.2 反应条件的优化
3.3 LAMP方法特异性检测结果
3.4 LAMP方法灵敏度检测结果
3.5 重复性和稳定性试验结果
3.6 经反应体系和反应条件优化后建立的PCMV LAMP检测方法
4. 讨论
4.1 引物设计
4.2 反应体系和反应条件的优化
4.3 LAMP特异性和敏感性
第三章 猪巨细胞病毒环介导等温扩增检测方法在四川省猪巨细胞病毒的流行病学调查中的应用
1 主要材料、试剂与仪器
1.1 实验材料
1.2 主要仪器
1.3 主要溶液及配制
2 试验方法
2.1 引物合成
2.2 样品DNA的抽取
2.3 LAMP法扩增
2.4 PCR扩增与结果判定
2.5 PCMV gB基因部分序列的克隆
2.6 序列分析
3 实验结果
3.1 四川省PCMV抗原检测结果
3.2 不同临床症状猪PCMV抗原检测结果
3.3 不同生长阶段猪PCMV抗原检测结果
3.4 不同器官组织中PCMV抗原检测结果
3.5 生物信息学分析
4 讨论
第四章 四川省猪巨细胞病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒、伪狂犬病毒与猪瘟病毒混合感染的流行病学调查
1 主要材料、试剂与仪器
1.1 主要材料
1.2 试剂与仪器
1.3 主要溶液及配制
2 试验方法
2.1 病料DNA的抽取
2.2 病料RNA的提取
2.3 引物合成
2.4 PCR/RT-PCR扩增
3 结果
3.1 PCMV、PRRSV、CSFV和PRV检测结果
3.2 PCMV、PRRSV、CSFV与PRV混合感染统计结果
4. 讨论
全文总结
参考文献
致谢
本文编号：3928486
【文章页数】：60 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
中文摘要
ABSTRACT
缩略词表
第一章 文献综述
1 PCMV
1.1 PCMV的概述
1.2 PCMV的病原学
1.3 PCMV的流行病学
1.4 PCMV的蛋白及其功能
1.5 PCMV的致病机理
1.6 PCMV的临床症状
1.7 PCMV的病理变化
1.8 PCMV的诊断技术
1.9 PCMV的防治
2 环介导等温扩增技术
2.1 LAMP的原理
2.2 LAMP的扩增特点
2.3 LAMP的不足与对策
2.4 LAMP的应用
3 研究的目的与意义
第二章 猪巨细胞病毒的环介导的等温扩增检测方法的建立
1 材料
1.1 实验材料
1.2 主要仪器
1.3 主要溶液及配制
2 实验方法
2.1 LAMP法引物设计及合成
2.2 LAMP法反应体系的优化
2.3 LAMP法反应条件的优化
2.4 LAMP法特异性试验
2.5 LAMP法敏感性试验
2.6 重复性和稳定性试验
3. 实验结果
3.1 LAMP法反应体系的优化结果
3.2 反应条件的优化
3.3 LAMP方法特异性检测结果
3.4 LAMP方法灵敏度检测结果
3.5 重复性和稳定性试验结果
3.6 经反应体系和反应条件优化后建立的PCMV LAMP检测方法
4. 讨论
4.1 引物设计
4.2 反应体系和反应条件的优化
4.3 LAMP特异性和敏感性
第三章 猪巨细胞病毒环介导等温扩增检测方法在四川省猪巨细胞病毒的流行病学调查中的应用
1 主要材料、试剂与仪器
1.1 实验材料
1.2 主要仪器
1.3 主要溶液及配制
2 试验方法
2.1 引物合成
2.2 样品DNA的抽取
2.3 LAMP法扩增
2.4 PCR扩增与结果判定
2.5 PCMV gB基因部分序列的克隆
2.6 序列分析
3 实验结果
3.1 四川省PCMV抗原检测结果
3.2 不同临床症状猪PCMV抗原检测结果
3.3 不同生长阶段猪PCMV抗原检测结果
3.4 不同器官组织中PCMV抗原检测结果
3.5 生物信息学分析
4 讨论
第四章 四川省猪巨细胞病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒、伪狂犬病毒与猪瘟病毒混合感染的流行病学调查
1 主要材料、试剂与仪器
1.1 主要材料
1.2 试剂与仪器
1.3 主要溶液及配制
2 试验方法
2.1 病料DNA的抽取
2.2 病料RNA的提取
2.3 引物合成
2.4 PCR/RT-PCR扩增
3 结果
3.1 PCMV、PRRSV、CSFV和PRV检测结果
3.2 PCMV、PRRSV、CSFV与PRV混合感染统计结果
4. 讨论
全文总结
参考文献
致谢
本文编号：3928486
本文链接：https://www.wllwen.com/yixuelunwen/dongwuyixue/3928486.html