细胞因子对治疗性乙肝疫苗DNA prime/MVA boost免疫策略的增强作用

发布时间：2024-03-26 21:40

　　慢性乙型肝炎是严重威胁人类健康的疾病之一，它是由乙型肝炎病毒的感染引起的。患者体内针对病毒的特异性细胞免疫功能低下，无法及时、彻底清除病毒，由机体产生的非特异性免疫反应造成了肝组织的慢性病理损伤。所以能够引起强烈细胞免疫应答的“prime-boost”免疫策略成为乙型肝炎免疫治疗的有力策略。我们构建了表达病毒表面抗原的DNA疫苗和重组痘病毒(MVA)载体疫苗，采取“prime-boost”免疫方案免疫小鼠。因为DNA疫苗的免疫原性较弱，所以利用细胞因子作为佐剂来增强疫苗的免疫原性。同时在乙肝转基因小鼠上考察此种免疫方案的治疗作用。 本论文共选择IL-2、IL-12、IL-15、IL-18、GM-CSF和IFN-γ六种鼠源细胞因子佐剂。论文第一部分实验以普通小鼠为动物模型，用细胞因子与HBV DNA疫苗同时免疫小鼠，然后以重组痘病毒疫苗加强免疫，检测不同细胞因子或其组合对HBV DNA疫苗的免疫加强作用。结果表明：1 在增强疫苗体液免疫和细胞免疫反应方面，IL-2质粒要强于IL-2蛋白，所以要选择质粒形式的细胞因子作为佐剂。2 在增强疫苗细胞免疫反应方面，IL-12、IFN-γ和...

【文章页数】：117 页

【文章目录】：
第一章 前言
    一 乙型肝炎病毒概述
        1 乙型肝炎的流行病学和临床症状
        2 乙型肝炎病毒的分子生物学
        3 乙型肝炎病毒感染和致病机理
    二 治疗性HBV疫苗的研究现状
        1 治疗性HBV DNA疫苗的历史
        2 重组MVA病毒疫苗的研究进展
        3 “prime-boost”免疫策略的优势
    三 细胞因子佐剂的研究进展
        1 细胞因子概述
        2 细胞因子在疫苗中的应用
        3 细胞因子的佐剂效应
        4 小结
    四 本论文的设计思想
第二章 实验材料和方法
    一 材料、仪器和溶液
        1 材料
        2 仪器
        3 溶液
    二 治疗性HBV DNA疫苗的构建及研究
        1 治疗性HBV DNA疫苗的构建
        2 治疗性HBV DNA疫苗在真核细胞中的表达分析
        3 质粒的大规模提取
    三 重组痘病毒疫苗的构建与研究
        1 重组痘病毒疫苗的构建
        2 重组痘病毒疫苗的鉴定
        3 重组痘病毒疫苗的扩增和纯化
        4 重组痘病毒滴度测定
    四 DNA-prime／MVA-boost混合免疫与单独免疫的比较
        1 动物试验设计
        2 抗体水平检测
        3 CTL实验
        4 ELISPOT实验
    五 细胞因子对治疗性HBV疫苗免疫应答的影响
        1 比较IL-2蛋白和质粒对治疗性HBV疫苗免疫应答的影响
        2 比较不同细胞因子对治疗性HBV疫苗的增强作用
        3 GM-CSF和IL-2联合应用对治疗性HBV疫苗免疫应答的影响
    六 治疗性HBV疫苗对转基因小鼠的治疗作用
        1 动物实验设计
        2 表面抗原水平检测
        3 表面抗体水平的检测
        4 HBV病毒定量
        5 CTL实验
        6 转氨酶检测
        7 病理切片
第三章 结果与讨论
    一 治疗性HBV DNA疫苗的构建
        1 获得表面抗原基因
        2 表面抗原基因连接到pGEM-T easy载体上
        3 表面抗原基因连接到真核表达载体VR1012上
        4 治疗性HBV DNA疫苗pVR1012／HBs表达蛋白的鉴定
        5 质粒的大规模提取
        6 小结
    二 重组痘病毒疫苗的构建、表达及鉴定
        1 MVA病毒重组穿梭质粒的构建
        2 重组痘病毒的筛选
        3 重组病毒的PCR鉴定
        4 重组病毒表面抗原的表达
        5 病毒滴度测定
        6 小结
    三 DNA-prime／MVA-boost混合免疫与单独免疫的比较
        1 MVA boost对DNA疫苗体液免疫的影响
        2 MVA boost对DNA疫苗CTL实验的影响
        3 MVA boost对DNA疫苗ELISPOT实验的影响
        4 小结
    四 细胞因子对治疗性HBV疫苗免疫应答的影响
        1 IL-2蛋白和质粒对治疗性HBV疫苗免疫应答的影响
        2 不同细胞因子对治疗性HBV疫苗免疫应答的影响
        3 联合GM-CSF和IL-2对治疗性HBV疫苗免疫应答的影响
        4 小结
    五 治疗性HBV疫苗对转基因小鼠的治疗作用
        1 转基因小鼠血清中表面抗原浓度的检测
        2 转基因小鼠血清中表面抗体浓度的检测
        3 转基因小鼠血清中HBV DNA病毒滴度的检测
        4 转基因小鼠肝功能指标—谷丙转氨酶检测
        5 转基因小鼠的肝脏病理切片
        6 CTL实验检测结果
        7 小结
参考文献
致谢
中文摘要
英文摘要
作者简历



本文编号：3939721