体外神经细胞过表达Mex3C-1对诱导性Fos表达的影响

发布时间：2024-03-13 21:22

　　目的探讨Mex3C-1对卡巴胆碱诱导的Fos表达的影响。方法将具有可持续表达人Mex3C-1序列的质粒pLV-CMV-Mex3C (OE)在HEK293T细胞中包装成慢病毒载体,同时制备非特异性对照(NC)CmiR0001-MR03的慢病毒载体,分别感染人神经母细胞瘤细胞SH-SY5Y,经嘌呤霉素筛选后得到稳定高表达Mex3C-1和阴性对照细胞系,用Real time PCR和Western blot方法检测Mex3C-1的基因和蛋白表达效果。之后用卡巴胆碱诱导Fos表达,在诱导0、30、60、90和120min后分别提取mRNA,采用Real time PCR方法检测Fos mRNA的相对表达量。结果 Real time PCR检测结果显示,OE组的Mex3C-1 mRNA的相对表达量(21.11±0.60)高于NC组(1.03±0.13)(t=32.63,P=0.000)。Western blot结果显示,在82kDa处OE组的Mex3C-1蛋白表达量高于NC组(P<0.001)。Real time PCR检测不同干预时间两组Fos mRNA,除0min外各个时间点OE组均高...

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【部分图文】：

图1pLV-CMV-Mex3C和CmiR0001-MR03质粒图谱

图3Mex3C-1过表达SH-SY5Y细胞系Mex3C-1蛋白表达量，计x3C同表

与NC组比较*P<0.01（n=3）图3Mex3C-1过表达SH-SY5Y细胞系Mex3C-1蛋白表达量Kit显影试剂盒曝光成像。随后用洗膜液洗去抗体，重新孵育一抗β-actin鼠抗单克隆抗体（1∶5000），二抗胎牛抗鼠HRP抗体（1∶5000）重复上述步骤，对内参蛋白曝光成像....

图2Mex3C-1过表达SH-SY5Y细胞系Mex3C-1mRNA的相对表达量

时间点Mex3C-1高表达的OE组与阴性对照NC组相比，FosmRNA表达量差异有统计学意义（F=287.069，P=0.000），且过表达OE组与对照NC组的五个时间点中均在加入卡巴胆碱诱导60min时最高，其中于30min和60min时OE组的表达量约为NC组的2倍，且除0m....

图4不同干预时间两组SH-SY5Y细胞株的FosmRNA表达量比较

tal.Mex3cmutationreducesadiposityandincreasesenergyexpenditure［J］.MolCellBiol，2012，32（21）:4350-4362.［4］HanC，JiaoY，ZhaoQ，etal.Mex3cmutationre....

本文编号：3927589