血管抑素基因克隆及在E.coli DH5α的表达

发布时间：2024-03-13 19:55

　　血管抑素(Angiostatin，AS)是血浆纤溶酶原(Plasminogen，PLG)经蛋白水解酶降解生成的多肽片段，是直接作用于血管内皮细胞的血管生成抑制剂。AS可以阻抑血管生成治疗由病理性血管形成而导致的疾病，尤其是可通过抗肿瘤新生血管生成抑制肿瘤的生长与转移，有重要的临床应用价值。本研究以高效、低毒、广谱且无耐药性产生的内源性血管抑制因子AS为研究对象，构建含AS基因的分泌型重组表达质粒pEZZ18-AS，在E.coli DH5α内表达并对其进行鉴定。 本研究第一部分包括肝组织中总RNA的分离提取；RT-PCR扩增出血管抑素基因。首先，采集术后新鲜肝组织，并于无RNase的条件下分离纯化总RNA。其次，在其完整性及纯度鉴定后做RT-PCR扩增目的基因AS，分别在上下游引物引入限制性内切酶EcoR I与Xba I的酶切位点及相对应的保护碱基。本部分成功获取AS(即Kringle 1-4区域)与PLG Kringle 1-5区(即K1-5)的基因片段。将K1-5 PCR产物测序，结果为：除测序引物后边有一段不稳定序列，其余序列均与Gene Bank里PLG cDNA中相应核...

【文章页数】：67 页

【学位级别】：硕士

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英文缩略语
中文摘要
英文摘要
前言
第一部分 由肝组织提取总RNA及RT-PCR
    材料与方法
    结果
    讨论
第二部分 含血管抑素基因分泌型表达质粒的构建
    材料与方法
    结果
    讨论
第三部分 重组人AS在大肠杆菌中的初步表达
    材料与方法
    结果
    讨论
小结
参考文献
综述
致谢



本文编号：3927490