大鼠致热后下丘脑PO/AH区细胞TRPV1通道的磷酸化及机制的研究
发布时间：2023-03-31 21:03
目的:瞬时受体电位香草酸亚型1(transient receptor potential vanilloid subfamily member 1,TRPV1)作为体温的负调节物质,在体温升高时表达增多,能起到有效的体温的负调节作用。TRPV1的表达能被许多种物质所调节,然而,在体条件下,TRPV1的磷酸化是否对TRPV1的表达是否有影响还不清楚。本研究通过在体情况下应用蛋白激酶A(Protein kinase A,PKA)拮抗剂H89、蛋白激酶C(Protein kinase C,PKC)拮抗剂Calphostin C和PKC激动剂PMA探讨它们对体温的影响,同时检测TRPV1和磷酸化TRPV1(p-TRPV1)的活性,下丘脑细胞内钙离子表达水平,进而探讨TRPV1的磷酸化对在体条件下TRPV1的表达的影响。除了致热原LPS致热这种致热方式之外,还同时采用了人工气候室致热的方式,探讨人工气候室致热后TRPV1和p-TRPV1表达的变化。研究方法:(1)LPS致热动物模型将实验动物随机分为对照组和LPS致热组。对LPS组大鼠采用腹腔注射LPS。(2)对LPS致热动物应用PKA抑制剂将动...
【文章页数】：97 页
【学位级别】：博士
【文章目录】：
摘要
Abstract
英文缩略词
第一部分：大鼠经LPS致热后下丘脑PO/AH区细胞TRPV1通道的磷酸化及机制的研究
1 前言
2 材料与方法
2.1 实验材料
2.1.1 主要仪器
2.1.2 主要试剂
2.1.3 实验动物
2.2 实验方法
2.2.1 动物处理及实验分组
2.2.2 遥测体温发射子体内植入及体温测量
2.2.3 大鼠侧脑室插管
2.2.4 Western blotting检测下丘脑PO/AH区TRPV1和磷酸化TRPV1表达水平
2.2.5 下丘脑PO/AH区细胞内PKA、PKC含量的测定
2.2.6 统计学处理
3 结果
3.1 LPS对大鼠体温的影响
3.2 Western blotting检测大鼠在LPS致热时下丘脑PO/AH区细胞TRPV1和p-TRPV1的表达
3.3 大鼠在LPS致热时下丘脑PO/AH区细胞PKA含量检测
3.4 大鼠在LPS致热时下丘脑PO/AH区细胞PKC含量检测
3.5 PKA抑制剂H89、PKC抑制剂calphostin C和PKC激动剂PMA对大鼠下丘脑PO/AH区细胞TRPV1和p-TRPV1表达的影响
3.6 相关分析
4 讨论
5 结论
第二部分：大鼠经热负荷后下丘脑PO/AH区细胞TRPV1通道的磷酸化及机制的探讨
1 前言
2 材料与方法
2.1 实验材料
2.1.1 主要仪器
2.1.2 主要试剂
2.1.3 实验动物
2.2 实验方法
2.2.1 实验动物处理及分组
2.2.2 发射子植入及体温测量
2.2.3 Western blotting检测下丘脑PO/AH区TRPV1和磷酸化TRPV1表达量
2.2.4 下丘脑PO/AH区细胞内PKA、PKC含量的测定
2.2.5 统计学处理
3 结果
3.1 热负荷条件下，各实验组大鼠体温的变化
3.2 热负荷条件下，大鼠PO/AH区组织中TRPV1和p-TRPV1的表达
3.3 热负荷条件下，各实验组大鼠PKA含量检测
3.4 热负荷条件下，各实验组大鼠PKC含量检测
3.5 LPS致热组与热负荷组对比实验
4 讨论
5 结论
第三部分：大鼠下丘脑PO/AH区细胞TRPV1通道磷酸化对TRPV1通道活性及体温调控作用的影响
1 前言
2 材料与方法
2.1 实验材料
2.1.1 主要仪器
2.1.2 主要试剂
2.1.3 实验动物
2.2 实验方法
2.2.1 动物处理及分组
2.2.2 大鼠侧脑室插管
2.2.3 发射子植入及体温测量
2.2.4 下丘脑PO/AH区细胞内钙离子浓度测定
2.1.5 Western blotting检测下丘脑PO/AH区磷酸化TRPV1表达量
2.2.6 统计学处理
3 结果
3.1 LPS致热过程中，p-TRPV1的表达水平及细胞内钙离子浓度( [Ca2+]i)的变化
3.2 PKA抑制剂H89对体温、p-TRPV1的表达水平及[Ca2+]i的影响
3.2.1 PKA含量检测
3.2.2 PO/AH区p-TRPV1的表达水平及细胞内钙离子浓度的变化
3.2.3 体温变化
3.3 PKC抑制剂calphostin C对p-TRPV1的表达水平、[Ca2+]i及体温的影响
3.4 PKC激动剂PMA对p-TRPV1的表达水平、[Ca2+]i及体温的影响
3.5 PKC抑制剂calphostin C及激动剂PMA对PKC含量的影响
4 讨论
5 结论
小结
本研究创新性的自我评价
参考文献
综述
参考文献
攻读学位期间取得的研究成果
致谢
个人简介
本文编号：3775785
【文章页数】：97 页
【学位级别】：博士
【文章目录】：
摘要
Abstract
英文缩略词
第一部分：大鼠经LPS致热后下丘脑PO/AH区细胞TRPV1通道的磷酸化及机制的研究
1 前言
2 材料与方法
2.1 实验材料
2.1.1 主要仪器
2.1.2 主要试剂
2.1.3 实验动物
2.2 实验方法
2.2.1 动物处理及实验分组
2.2.2 遥测体温发射子体内植入及体温测量
2.2.3 大鼠侧脑室插管
2.2.4 Western blotting检测下丘脑PO/AH区TRPV1和磷酸化TRPV1表达水平
2.2.5 下丘脑PO/AH区细胞内PKA、PKC含量的测定
2.2.6 统计学处理
3 结果
3.1 LPS对大鼠体温的影响
3.2 Western blotting检测大鼠在LPS致热时下丘脑PO/AH区细胞TRPV1和p-TRPV1的表达
3.3 大鼠在LPS致热时下丘脑PO/AH区细胞PKA含量检测
3.4 大鼠在LPS致热时下丘脑PO/AH区细胞PKC含量检测
3.5 PKA抑制剂H89、PKC抑制剂calphostin C和PKC激动剂PMA对大鼠下丘脑PO/AH区细胞TRPV1和p-TRPV1表达的影响
3.6 相关分析
4 讨论
5 结论
第二部分：大鼠经热负荷后下丘脑PO/AH区细胞TRPV1通道的磷酸化及机制的探讨
1 前言
2 材料与方法
2.1 实验材料
2.1.1 主要仪器
2.1.2 主要试剂
2.1.3 实验动物
2.2 实验方法
2.2.1 实验动物处理及分组
2.2.2 发射子植入及体温测量
2.2.3 Western blotting检测下丘脑PO/AH区TRPV1和磷酸化TRPV1表达量
2.2.4 下丘脑PO/AH区细胞内PKA、PKC含量的测定
2.2.5 统计学处理
3 结果
3.1 热负荷条件下，各实验组大鼠体温的变化
3.2 热负荷条件下，大鼠PO/AH区组织中TRPV1和p-TRPV1的表达
3.3 热负荷条件下，各实验组大鼠PKA含量检测
3.4 热负荷条件下，各实验组大鼠PKC含量检测
3.5 LPS致热组与热负荷组对比实验
4 讨论
5 结论
第三部分：大鼠下丘脑PO/AH区细胞TRPV1通道磷酸化对TRPV1通道活性及体温调控作用的影响
1 前言
2 材料与方法
2.1 实验材料
2.1.1 主要仪器
2.1.2 主要试剂
2.1.3 实验动物
2.2 实验方法
2.2.1 动物处理及分组
2.2.2 大鼠侧脑室插管
2.2.3 发射子植入及体温测量
2.2.4 下丘脑PO/AH区细胞内钙离子浓度测定
2.1.5 Western blotting检测下丘脑PO/AH区磷酸化TRPV1表达量
2.2.6 统计学处理
3 结果
3.1 LPS致热过程中，p-TRPV1的表达水平及细胞内钙离子浓度( [Ca2+]i)的变化
3.2 PKA抑制剂H89对体温、p-TRPV1的表达水平及[Ca2+]i的影响
3.2.1 PKA含量检测
3.2.2 PO/AH区p-TRPV1的表达水平及细胞内钙离子浓度的变化
3.2.3 体温变化
3.3 PKC抑制剂calphostin C对p-TRPV1的表达水平、[Ca2+]i及体温的影响
3.4 PKC激动剂PMA对p-TRPV1的表达水平、[Ca2+]i及体温的影响
3.5 PKC抑制剂calphostin C及激动剂PMA对PKC含量的影响
4 讨论
5 结论
小结
本研究创新性的自我评价
参考文献
综述
参考文献
攻读学位期间取得的研究成果
致谢
个人简介
本文编号：3775785
本文链接：https://www.wllwen.com/xiyixuelunwen/3775785.html
最近更新
教材专著