维氏气单胞菌对草鱼溶菌酶表达的影响及其免疫效果的研究
发布时间：2024-03-14 03:12
近几年来由于养殖方法不当和水体环境破坏导致各种鱼类病害频繁发生,给鱼类养殖业带来了很大的经济损失。维氏气单胞菌(Aeromonas veronii)可以引起草鱼(Ctenopharyngodon idellus)败血症,短期内造成大量死亡,课题组前期从患病草鱼中筛选到了一株毒性较强的维氏气单胞菌AvX005。草鱼作为低等脊椎动物,当病源微生物入侵时,非特异性免疫发挥重要作用,而溶菌酶是非特异性免疫中的关键部分。本论文主要研究了草鱼g型溶菌酶和c型溶菌酶作为免疫刺激剂保护草鱼免受AvX005感染的作用机制,对草鱼健康养殖研究和应用具有一定的价值。为研究草鱼在感染AvX005后g型和c型溶菌酶的表达变化,采用qRT-PCR技术对感染AvX005的草鱼进行Lys-g和Lys-c的表达水平分析,结果表明草鱼感染AvX005后3 h肝脏和脾脏中基因lys-g和lys-c的转录均被显著诱导。在肝脏和脾脏中,基因lys-g的转录水平在感染后24 h达到峰值,分别提高13倍和4.5倍;基因lys-c的转录水平在感染后12 h达到峰值,分别提高7.5倍和27倍。因此推测两种溶菌酶蛋白在草鱼早期抵御AvX...
【文章页数】：87 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
ABSTRACT
第一章 绪论
1.1 草鱼病害
1.2 病原菌维氏气单胞菌
1.2.1 维氏气单胞菌简介
1.2.2 维氏气单胞菌对渔业的危害
1.2.3 维氏气单胞菌疫苗的研究进展
1.2.4 维氏气单胞菌致病机制的研究进展
1.3 鱼类溶菌酶研究进展
1.3.1 溶菌酶结构
1.3.2 溶菌酶功能
1.3.3 鱼类溶菌酶的分布
1.3.4 溶菌酶在渔业生产中的应用
1.4 免疫佐剂QCDC
1.5 立题依据和研究目的
第二章 材料与方法
2.1 材料
2.1.1 菌株、质粒和细胞
2.1.2 实验草鱼
2.1.3 培养基和抗生素
2.1.4 主要试剂盒及试剂
2.1.5 引物
2.1.6 仪器设备
2.2 实验方法
2.2.1 正常生理状态下草鱼g型和c型溶菌酶转录水平
2.2.2 草鱼感染AvX005后g型和c型溶菌酶转录水平变化
2.2.3 草鱼g型和c型溶菌酶原核表达载体的构建及鉴定
2.2.4 重组蛋白rLys-g和 rLys-c的分离纯化
2.2.5 重组蛋白rLys-g和 rLys-c抑菌活性
2.2.6 草鱼g型和c型溶菌酶真核表达载体的构建及鉴定
2.2.7 草鱼溶菌酶对草鱼肝脏细胞感染AvX005的保护效果
2.2.8 重组质粒对草鱼抵抗AvX005感染的保护作用
2.2.9 草鱼注射lys-g和 lys-c后免疫反应
第三章 结果与分析
3.1 序列分析
3.2 正常生理状态下草鱼g型和c型溶菌酶的转录水平
3.3 草鱼感染AvX005后g型和c型溶菌酶转录水平变化
3.4 携带His标签的重组质粒构建及鉴定
3.4.1 pET28a-lys-g重组质粒的构建与酶切鉴定
3.4.2 pET28a-lys-c重组质粒的构建与酶切鉴定
3.4.3 pSmartⅡ-lys-c重组质粒的构建与酶切鉴定
3.5 重组蛋白rLys-g和 rLys-c对 AvX005 的裂解活性
3.5.1 重组蛋白rLys-g和 rLys-c的诱导表达
3.5.2 重组蛋白rLys-g和 rLys-c的纯化与复性
3.5.3 重组蛋白rLys-g和 rLys-c活性检测
3.5.4 重组蛋白rLys-g和 rLys-c抑菌活性检测
3.6 真核表达载体的构建及鉴定
3.7 重组质粒保护L8824细胞免受AvX005感染的能力
3.7.1 病原菌AvX005对细胞L8824的半致死浓度
3.7.2 细胞L8824 中重组蛋白rLys-g和 rLys-c的表达
3.7.3 重组溶菌酶蛋白对细胞L8824抗AvX005感染的保护效果
3.8 草鱼注射lys-g和 lys-c后免疫效果
3.8.1 注射lys-g和 lys-c对草鱼抗AvX005 感染的影响
3.8.2 注射lys-g和 lys-c对草鱼抗菌能力的影响
3.8.3 注射lys-g和 lys-c后攻毒,草鱼组织病理学变化
3.9 草鱼注射lys-g和 lys-c后免疫反应
3.9.1 注射lys-g和 lys-c后血清溶菌酶活力
3.9.2 注射lys-g和 lys-c后非特异性免疫变化
3.9.3 注射lys-g和 lys-c后相关免疫因子变化
第四章 讨论
4.1 病原菌AvX005对草鱼的致病性
4.2 草鱼感染AvX005后溶菌酶的表达变化
4.3 重组溶菌酶对致病菌的抑菌效果及对细胞的保护作用
4.4 草鱼注射lys-g和 lys-c后免疫效果
4.5 草鱼注射lys-g和 lys-c后免疫反应
第五章 结论与展望
5.1 结论
5.2 展望
参考文献
缩略词表
论文发表情况
本论文感谢以下基金项目资助
致谢
本文编号：3927972
【文章页数】：87 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
ABSTRACT
第一章 绪论
1.1 草鱼病害
1.2 病原菌维氏气单胞菌
1.2.1 维氏气单胞菌简介
1.2.2 维氏气单胞菌对渔业的危害
1.2.3 维氏气单胞菌疫苗的研究进展
1.2.4 维氏气单胞菌致病机制的研究进展
1.3 鱼类溶菌酶研究进展
1.3.1 溶菌酶结构
1.3.2 溶菌酶功能
1.3.3 鱼类溶菌酶的分布
1.3.4 溶菌酶在渔业生产中的应用
1.4 免疫佐剂QCDC
1.5 立题依据和研究目的
第二章 材料与方法
2.1 材料
2.1.1 菌株、质粒和细胞
2.1.2 实验草鱼
2.1.3 培养基和抗生素
2.1.4 主要试剂盒及试剂
2.1.5 引物
2.1.6 仪器设备
2.2 实验方法
2.2.1 正常生理状态下草鱼g型和c型溶菌酶转录水平
2.2.2 草鱼感染AvX005后g型和c型溶菌酶转录水平变化
2.2.3 草鱼g型和c型溶菌酶原核表达载体的构建及鉴定
2.2.4 重组蛋白rLys-g和 rLys-c的分离纯化
2.2.5 重组蛋白rLys-g和 rLys-c抑菌活性
2.2.6 草鱼g型和c型溶菌酶真核表达载体的构建及鉴定
2.2.7 草鱼溶菌酶对草鱼肝脏细胞感染AvX005的保护效果
2.2.8 重组质粒对草鱼抵抗AvX005感染的保护作用
2.2.9 草鱼注射lys-g和 lys-c后免疫反应
第三章 结果与分析
3.1 序列分析
3.2 正常生理状态下草鱼g型和c型溶菌酶的转录水平
3.3 草鱼感染AvX005后g型和c型溶菌酶转录水平变化
3.4 携带His标签的重组质粒构建及鉴定
3.4.1 pET28a-lys-g重组质粒的构建与酶切鉴定
3.4.2 pET28a-lys-c重组质粒的构建与酶切鉴定
3.4.3 pSmartⅡ-lys-c重组质粒的构建与酶切鉴定
3.5 重组蛋白rLys-g和 rLys-c对 AvX005 的裂解活性
3.5.1 重组蛋白rLys-g和 rLys-c的诱导表达
3.5.2 重组蛋白rLys-g和 rLys-c的纯化与复性
3.5.3 重组蛋白rLys-g和 rLys-c活性检测
3.5.4 重组蛋白rLys-g和 rLys-c抑菌活性检测
3.6 真核表达载体的构建及鉴定
3.7 重组质粒保护L8824细胞免受AvX005感染的能力
3.7.1 病原菌AvX005对细胞L8824的半致死浓度
3.7.2 细胞L8824 中重组蛋白rLys-g和 rLys-c的表达
3.7.3 重组溶菌酶蛋白对细胞L8824抗AvX005感染的保护效果
3.8 草鱼注射lys-g和 lys-c后免疫效果
3.8.1 注射lys-g和 lys-c对草鱼抗AvX005 感染的影响
3.8.2 注射lys-g和 lys-c对草鱼抗菌能力的影响
3.8.3 注射lys-g和 lys-c后攻毒,草鱼组织病理学变化
3.9 草鱼注射lys-g和 lys-c后免疫反应
3.9.1 注射lys-g和 lys-c后血清溶菌酶活力
3.9.2 注射lys-g和 lys-c后非特异性免疫变化
3.9.3 注射lys-g和 lys-c后相关免疫因子变化
第四章 讨论
4.1 病原菌AvX005对草鱼的致病性
4.2 草鱼感染AvX005后溶菌酶的表达变化
4.3 重组溶菌酶对致病菌的抑菌效果及对细胞的保护作用
4.4 草鱼注射lys-g和 lys-c后免疫效果
4.5 草鱼注射lys-g和 lys-c后免疫反应
第五章 结论与展望
5.1 结论
5.2 展望
参考文献
缩略词表
论文发表情况
本论文感谢以下基金项目资助
致谢
本文编号：3927972
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