鹿茸提取物调控软骨细胞的生物学机制研究

发布时间：2024-03-25 03:13

　　目的:本研究旨在应用转录组学、蛋白质组学等技术手段,探讨鹿茸提取物对于软骨细胞调控作用的生物学机制。方法:本研究采用快速生长期鹿茸为研究对象,采用高速匀浆机制备鹿茸匀浆,采用冷冻干燥法获得鹿茸冻干粉。应用SDS-PAGE凝胶电泳测定鹿茸提取物中蛋白含量。采用72h内出生乳鼠的肋软骨制备原代软骨细胞,采用不同浓度的鹿茸提取物(0,0.02,0.04,0.08,0.16,0.32,0.64,1.28 mg/ml)对软骨细胞进行培养,应用CCK-8观察软骨细胞增殖能力,同时应用Alcian blue 8GX进行染色,观察软骨细胞增殖情况。采用RNA-seq技术对软骨细胞进行转录组学分析,提取总RNA,构建文库,应用Agilent 2100 Bioanalyzer对文库进行质量检测,使用Illumina HiSeq 2500测序平台进行基因测序,对基因差异表达情况进行分析。采用iTRAQ技术对血清蛋白质组学进行分析。选择雄性SD大鼠为研究对象,采用饮用水和鹿茸提取物灌胃处理,对大鼠血清蛋白进行iTRAQ标记,应用Mascot和Proteome Discoverer软件对蛋白进行鉴别,将所得结果...

【文章页数】：150 页

【学位级别】：博士

【部分图文】：

图-1鹿茸提取物SDS凝胶电泳结果

长春中医药大学2020届博士学位论文324)应用多功能酶标仪在450nm波长条件下测定吸光度；5)根据细胞存活率绘制细胞增殖率曲线；6)将细胞置于24孔细胞培养板内，细胞密度1×105/mL，标准状态培养4h（温度37℃，饱和湿度，体积分数5%CO2），按照浓度递增顺序，依次加入....

图-2595nm波长下蛋白标准曲线

长春中医药大学2020届博士学位论文33蛋白质浓度（ug/ml）图-2595nm波长下蛋白标准曲线（2）快速生长期鹿茸提取物能够促进原代软骨细胞增殖，且呈剂量依赖性。为了探究鹿茸提取物对于小鼠软骨细胞增殖的影响，我们应用不同浓度的快速生长期鹿茸提取物（0,0.02,0.04,0.....

图-3鹿茸提取物对软骨细胞增殖的作用

长春中医药大学2020届博士学位论文34图-3鹿茸提取物对软骨细胞增殖的作用。应用CCK-8观察软骨细胞增值情况，在每组细胞内分别按照浓度递增顺序（0,0.02,0.04,0.08,0.16,0.32,0.64,1.28mg/ml）加入鹿茸提取物培养24h，以非干预组为对照，观察....

图-4应用Alcianblue8GX对各组软骨

长春中医药大学2020届博士学位论文350.16mg/ml0.32mg/ml0.64mg/ml1.28mg/ml图-4应用Alcianblue8GX对各组软骨细胞进行染色观察，可见随着DAE浓度递增，细胞密度逐渐增高，软骨细胞增殖与鹿茸提取物浓度呈正相关。图-5应用盐酸胍提取Al....

本文编号：3938450