基于SRC-3途径探讨六神丸抑制结肠癌转移的机制

发布时间：2024-02-26 21:15

　　目的:明确六神丸的抗肿瘤转移作用,探讨SRC-3途径在结肠癌转移中的作用,进一步探讨六神丸调控SRC-3途径抑制结肠癌转移的机制。方法:运用CCK-8实验检测细胞活性,运用克隆形成实验检测细胞增殖情况,运用Transwell实验检测细胞侵袭和迁移情况,皮下瘤动物模型检测各干预因素对结肠癌瘤体增长的影响,裸鼠原位移植瘤肝转移动物模型检测各干预因素对结肠癌肝转移的影响,小动物活体成像观察结肠癌原位瘤及转移灶的形成情况。RT-PCR检测miR-497表达情况。HE染色检测肝脏组织内瘤灶形成情况。双荧光素酶报告基因对miR-497靶基因进行验证。慢病毒感染法构建目的基因稳定表达细胞株,质粒瞬时转染法提高目的基因在细胞中的表达水平。结果:(1)六神丸可以抑制炎症相关肿瘤细胞增殖和迁移,且下调细胞中SRC-3蛋白的表达;(2)六神丸可以抑制炎症相关肿瘤组织的细胞增殖和转移;(3)SRC-3促进结肠癌细胞的侵袭和迁移,敲减SRC-3抑制结肠癌肝转移;(4)SRC-3下调miR-497的表达,miR-497抑制结肠癌的肝转移,Cyclin D2是miR-497直接功能性靶标;(5)SRC-3/miR-...

【文章页数】：102 页

【学位级别】：博士

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英文缩略词
中文摘要
Abstract
引言
第一部分 六神丸抑制炎症相关肿瘤转移
    1 实验材料
        1.1 细胞株
        1.2 实验动物
        1.3 主要仪器设备
        1.4 主要试剂
        1.5 主要溶液的配制
    2 实验方法
        2.1 细胞培养相关技术
        2.2 CCK-8检测
        2.3 克隆形成实验
        2.4 Transwell实验
        2.5 稳定表达荧光素酶细胞株构建
        2.6 动物模型的构建
        2.7 小动物活体成像检测
        2.8 实验分组和给药
        2.9 统计方法
    3 实验结果
        3.1 六神丸抑制炎症相关的肿瘤细胞活性
        3.2 六神丸抑制炎症相关肿瘤细胞的增殖和迁移
        3.3 六神丸抑制炎症相关肿瘤组织的细胞增殖
        3.4 六神丸抑制炎症相关肿瘤组织的细胞转移
        3.5 六神丸下调炎症相关肿瘤细胞中SRC-3表达
    4 分析与讨论
第二部分 SRC-3促进结肠癌转移
    1 实验材料
        1.1 细胞株
        1.2 实验动物
        1.3 主要仪器设备
        1.4 主要试剂
        1.5 主要溶液的配制
    2 实验方法
        2.1 细胞培养相关技术
        2.2 质粒的扩增
        2.3 细胞转染技术
        2.4 细胞蛋白的提取
        2.5 细胞蛋白的定量
        2.6 细胞RNA的提取
        2.7 Western blot
        2.8 RT-PCR检测
        2.9 HE染色
        2.10 统计方法
    3 实验结果
        3.1 稳定高/低表达SRC-3的人结肠癌细胞株的建立及鉴定
        3.2 SRC-3促进细胞的增殖
        3.3 SRC-3促进细胞的迁移和侵袭
        3.4 敲减SRC-3抑制结肠癌肝转移
        3.5 SRC-3对miR-497表达的影响
    4 分析与讨论
第三部分 SRC-3/miR-497/cyclin D2信号轴调控结肠癌转移
    1 实验材料
        1.1 细胞株
        1.2 实验动物
        1.3 主要仪器设备
        1.4 主要试剂
        1.5 主要溶液的配制
    2 实验方法
        2.1 报告基因质粒共转染细胞
        2.2 Luciferase检测
        2.3 统计方法
    3 实验结果
        3.1 miR-497抑制结肠癌瘤体的增长
        3.2 miR-497抑制结肠癌的肝转移
        3.3 Cyclin D2是miR-497直接功能性靶标
        3.4 SRC-3调控miR-497表达
        3.5 SRC-3/miR-497/Cyclin D2介导的EMT促进结肠癌的转移
    4 分析与讨论
第四部分 六神丸通过调控SRC-3途径抑制结肠癌转移
    1 实验材料
        1.1 细胞株
        1.2 实验动物
        1.3 主要仪器设备
        1.4 主要试剂
        1.5 主要溶液的配制
    2 实验方法
        2.1 细胞培养相关技术
        2.2 PDX动物模型的建立
        2.3 统计方法
    3 实验结果
        3.1 六神丸对结肠癌细胞株活性的影响
        3.2 六神丸对结肠癌细胞增殖的影响
        3.3 六神丸对结肠癌细胞株迁移的影响
        3.4 六神丸调控SRC-3途径介导的EMT相关蛋白的表达
        3.5 六神丸抑制SRC-3高表达结肠癌肿瘤增长
        3.6 六神丸抑制SRC-3高表达结肠癌肿瘤肝转移
        3.7 六神丸对结肠癌PDX动物模型的影响
    4 分析与讨论
创新点
结果及结论
致谢
参考文献
附录一 文献综述 六神丸治疗肿瘤的研究进展
    参考文献
附录二 在读期间发表论文和成果
附录三 发表论文全文



本文编号：3911865