利用肝癌外泌体发现lnc85标志物及传递Cu-Cy纳米光敏剂的研究
发布时间：2023-04-10 17:51
肝细胞癌(Hepatocellular carcinoma,HCC)是全球范围内的恶性肿瘤之一。在中国具有相对较高的发病率和病死率,2015年HCC新发病例和死亡病例数分别为466,100和422,100例。临床上,由于缺乏特异性的生物标志物和明显的临床症状,大多数HCC患者在被确诊时已处于肝癌晚期,超过80%的患者出现预后不良。另外由于肝癌的复发和转移,目前应用于临床的治疗方法都存在一定的局限性,且治疗效果难以尽如人意。因此,研究与HCC发病和发展有关的分子机制从而发现新的治疗靶点,同时研发新的有效的治疗手段迫在眉睫。外泌体是由多种类型细胞分泌,粒径在30～150 nm之间的囊泡样小体。它包含有供体母细胞的多种蛋白质和核酸物质(包括DNA和RNA),通过作为细胞间通讯的介质参与多种生物学过程,如细胞增殖、迁移和凋亡活动等。其内含物与机体的病理及生理状态密切相关。有研究表明,外泌体在疾病,尤其是在癌症的起源和发展中起着重要作用,是癌症恶性进展的重要参与者。因此分析循环外泌体中的内含物、揭示HCC发生发展的分子机制,有助于发现新的治疗靶点、开发疾病的生物标志物。近年来,循环外泌体中的长链...
【文章页数】：206 页
【学位级别】：博士
【文章目录】：
个人简历
中英文缩写注释表
摘要
ABSTRACT
第一章 利用肝癌外泌体发现LNC85 标志物及相关作用机制研究
前言
1 实验材料
1.1 实验样本
1.2 实验细胞
1.3 实验试剂与耗材
1.4 实验仪器设备
2 实验方法
2.1 细胞复苏、培养、传代与冻存
2.2 外泌体的提取与鉴定
2.3 RNA全转录组测序
2.4 肝细胞癌患者血浆外泌体中RNA表达特点分析
2.5 实时荧光定量PCR
2.6 细胞瞬时转染
2.7 CCK-8 试剂盒检测细胞增殖
2.8 流式细胞仪检测细胞凋亡
2.9 Transwell检测细胞侵袭
2.10 Westren blot分析细胞增殖蛋白
2.11 生物信息学分析
2.12 统计学分析
3 技术路线
4 实验结果
4.1 采取血浆样品的患者信息
4.2 RNA全转录组测序结果
4.3 HCC血浆外泌体中lncRNA与 mRNA的表达特征
4.4 差异表达lncRNA的筛选
4.5 候选差异表达lncRNA的 qRT-PCR验证
4.6 候选lncRNA对细胞增殖的影响
4.7 对细胞凋亡的影响
4.8 对细胞侵袭能力的影响
4.9 lnc85 的亚细胞定位及靶基因的预测
4.10 lnc85与mir-324-5p表达的关联性
4.11 lnc85 调控mir-324-5p下游基因的表达
4.12 lnc85 在肝癌中的表达及临床意义
5 讨论
6 小结
参考文献
第二章 CU-CY新型纳米光敏剂抗肝癌及外泌体传递效应的研究
前言
1 实验材料
1.1 实验细胞
1.2 实验裸鼠
1.3 主要的相关试剂
1.4 实验仪器
2 实验方法
2.1 细胞复苏、培养与冻存
2.2 铜胺纳米材料的合成
2.3 铜胺纳米材料的表征
2.4 RNO脱色实验检测单线态氧的产生
2.5 MTT检测细胞增殖实验
2.6细胞克隆形成实验
2.7 细胞荧光染色实验观察细胞的生长状态
2.8流式细胞仪检测细胞凋亡实验
2.9 蛋白免疫印迹分析
2.10裸鼠皮下成瘤实验
2.11 苏木精-伊红染色
2.12 细胞外泌体的提取及鉴定
2.13 统计分析
3 技术路线
4 实验结果
4.1 铜胺纳米材料物理性质的表征
4.2 Cu-Cy NPs在紫外光的激发下产生单线态氧
4.3 Cu-Cy NPs对 HepG2 的细胞毒性
4.4 紫外光照对细胞生长状态的影响
4.5 细胞对Cu-Cy NPs的摄取情况
4.6 Cu-Cy NPs抑制细胞的增殖
4.7 Cu-Cy NPs诱导细胞的凋亡
4.8 Cu-Cy NPs抑制裸鼠移植瘤的生长
4.9 外泌体可作为Cu-Cy NPs的运输载体
5 讨论
6 小结
参考文献
全文总结
第三章 综述
1 外泌体的提取、鉴定及功能
前言
1.1 外泌体的提取技术
1.2 外泌体的鉴定
1.3 外泌体的功能
1.4 展望
参考文献
2 LNCRNA与肝细胞癌的发生、发展和转移
前言
2.1 长链非编码RNA的概述
2.2 长链非编码RNA的来源
2.3 长链非编码RNA的分类
2.4 长链非编码RNA的作用机制
2.5 长链非编码RNA与肝癌
2.6 展望
参考文献
3 光动力学治疗癌症的研究概况
前言
3.1 光动力学发展概述
3.2 光动力治疗的原理
3.3 光动力治疗的特点
3.4 光敏剂及光源
3.5 光动力学治疗肿瘤的临床应用
3.6 展望
参考文献
攻读博士期间发表及未发表的论文
致谢
本文编号：3788562
【文章页数】：206 页
【学位级别】：博士
【文章目录】：
个人简历
中英文缩写注释表
摘要
ABSTRACT
第一章 利用肝癌外泌体发现LNC85 标志物及相关作用机制研究
前言
1 实验材料
1.1 实验样本
1.2 实验细胞
1.3 实验试剂与耗材
1.4 实验仪器设备
2 实验方法
2.1 细胞复苏、培养、传代与冻存
2.2 外泌体的提取与鉴定
2.3 RNA全转录组测序
2.4 肝细胞癌患者血浆外泌体中RNA表达特点分析
2.5 实时荧光定量PCR
2.6 细胞瞬时转染
2.7 CCK-8 试剂盒检测细胞增殖
2.8 流式细胞仪检测细胞凋亡
2.9 Transwell检测细胞侵袭
2.10 Westren blot分析细胞增殖蛋白
2.11 生物信息学分析
2.12 统计学分析
3 技术路线
4 实验结果
4.1 采取血浆样品的患者信息
4.2 RNA全转录组测序结果
4.3 HCC血浆外泌体中lncRNA与 mRNA的表达特征
4.4 差异表达lncRNA的筛选
4.5 候选差异表达lncRNA的 qRT-PCR验证
4.6 候选lncRNA对细胞增殖的影响
4.7 对细胞凋亡的影响
4.8 对细胞侵袭能力的影响
4.9 lnc85 的亚细胞定位及靶基因的预测
4.10 lnc85与mir-324-5p表达的关联性
4.11 lnc85 调控mir-324-5p下游基因的表达
4.12 lnc85 在肝癌中的表达及临床意义
5 讨论
6 小结
参考文献
第二章 CU-CY新型纳米光敏剂抗肝癌及外泌体传递效应的研究
前言
1 实验材料
1.1 实验细胞
1.2 实验裸鼠
1.3 主要的相关试剂
1.4 实验仪器
2 实验方法
2.1 细胞复苏、培养与冻存
2.2 铜胺纳米材料的合成
2.3 铜胺纳米材料的表征
2.4 RNO脱色实验检测单线态氧的产生
2.5 MTT检测细胞增殖实验
2.6细胞克隆形成实验
2.7 细胞荧光染色实验观察细胞的生长状态
2.8流式细胞仪检测细胞凋亡实验
2.9 蛋白免疫印迹分析
2.10裸鼠皮下成瘤实验
2.11 苏木精-伊红染色
2.12 细胞外泌体的提取及鉴定
2.13 统计分析
3 技术路线
4 实验结果
4.1 铜胺纳米材料物理性质的表征
4.2 Cu-Cy NPs在紫外光的激发下产生单线态氧
4.3 Cu-Cy NPs对 HepG2 的细胞毒性
4.4 紫外光照对细胞生长状态的影响
4.5 细胞对Cu-Cy NPs的摄取情况
4.6 Cu-Cy NPs抑制细胞的增殖
4.7 Cu-Cy NPs诱导细胞的凋亡
4.8 Cu-Cy NPs抑制裸鼠移植瘤的生长
4.9 外泌体可作为Cu-Cy NPs的运输载体
5 讨论
6 小结
参考文献
全文总结
第三章 综述
1 外泌体的提取、鉴定及功能
前言
1.1 外泌体的提取技术
1.2 外泌体的鉴定
1.3 外泌体的功能
1.4 展望
参考文献
2 LNCRNA与肝细胞癌的发生、发展和转移
前言
2.1 长链非编码RNA的概述
2.2 长链非编码RNA的来源
2.3 长链非编码RNA的分类
2.4 长链非编码RNA的作用机制
2.5 长链非编码RNA与肝癌
2.6 展望
参考文献
3 光动力学治疗癌症的研究概况
前言
3.1 光动力学发展概述
3.2 光动力治疗的原理
3.3 光动力治疗的特点
3.4 光敏剂及光源
3.5 光动力学治疗肿瘤的临床应用
3.6 展望
参考文献
攻读博士期间发表及未发表的论文
致谢
本文编号：3788562
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