多管藻藻红蛋白与藻胆体的特性研究
发布时间：2024-04-10 03:54
红藻是藻类中重要的一大类群,在海洋生态、生物进化研究及食物和药物利用方面都具有极大的价值。红藻最大的特征就是其捕光天线系统——由藻胆蛋白和连接多肽组装形成的藻胆体。红藻的藻胆体来源于蓝藻,但远比蓝藻更为复杂,而目前藻胆蛋白和藻胆体(尤其是藻胆体)方面的研究主要集中在蓝藻,关于的红藻研究也多集中在低等红藻,如紫球藻、紫菜等,关于红藻藻胆体的研究更少目前基本是空白。本文研究了海洋高等红藻多管藻藻红蛋白和藻胆体的特性,以期为红藻藻胆体结构的研究打下基础。本文研究了利用SDS-PAGE进行R-藻红蛋白亚基分析的适宜条件,并得到了很好地结果,可以使各亚基清晰地分离。影响蛋白质SDS-PAGE的关键性因素是SDS浓度和离子强度,它们的作用机制应与SDS的临界胶团浓度及电泳系统中的单体SDS浓度或比例有关,本研究还可为其他蛋白质的亚基分析提供参考。分析多管藻藻红蛋白的亚基组成,主要有四种亚基：α、β、γ1、γ2,但SDS-PAGE分析时还发现两条分子质量大小约40 kDa和50 kDa的条带。通过研究得到了这两个条带的组成,分析其形成原因,为研究藻红蛋白各亚基间的关系、发色团的位置(尤其是γ亚基)及...
【文章页数】：144 页
【学位级别】：博士
【文章目录】：
摘要
Abstract
1. 前言
1.1 海洋红藻的研究价值
1.1.1 红藻在进化上的地位
1.1.2 红藻在海洋生态系统中的地位
1.1.3 海洋红藻的研究价值
1.2 藻胆蛋白
1.2.1 藻红蛋白
1.2.2 藻蓝蛋白
1.2.3 别藻蓝蛋白
1.3 藻胆体
2. 藻红蛋白的亚基组成分析(一) —SDS-PAGE分析藻红蛋白亚基组成时的适宜条件
2.1 材料与方法
2.2 结果
2.2.1 藻红蛋白亚基组成
2.2.2 四种因素对SDS-PAGE中藻红蛋白亚基分离效果的影响
2.2.3 亚基的分子质量
2.3 讨论
2.3.1 影响藻红蛋白SDS-PAGE的关键因素
2.3.2 SDS浓度和离子浓度对标准蛋白迁移的影响
2.3.3 作用机制探讨
3. 藻红蛋白的亚基组成分析(二) —多管藻藻红蛋白中的42.1 kDa与53.7 kDa多肽
3.1 材料与方法
3.2 结果
3.2.1 SDS-PAGE分析藻红蛋白亚基组成
3.2.2 梯度native-PAGE制备之R-PE SDS-PAGE
3.2.3 R-PE第二次SDS-PAGE
3.2.4 光照对R-PE的影响
3.3 讨论
3.3.1 42.1 kDa和53.7 kDa条带的形成原因
3.3.2. γ亚基对于R-PE聚合体稳定性的作用
4. 多管藻藻红蛋白的种类和聚合体形式(一) —直接提取的粗藻胆蛋白分析
4.1 材料与方法
4.2 结果与分析
4.2.1 50 mmol/L磷酸缓冲液浸提粗藻胆蛋白Sephadex G-150层析
4.2.2 水浸提粗藻胆蛋白Sephadex G-150层析
4.2.3 水浸提粗藻胆蛋白PE315-PE360部分第二次Sephadex G-150层析
4.2.4 水浸提粗藻胆蛋白放置9 d后Sephadex G-150层析
4.3 讨论
5. 多管藻藻红蛋白的种类和聚合体形式(二) —藻胆体中的藻红蛋白
5.1 材料与方法
5.2 结果与分析
5.2.1 解离藻胆体的蔗糖密度梯度离心
5.2.2 解离藻胆体的native-PAGE分析
5.3 讨论
6. 多管藻藻胆体的光谱特性
6.1 材料与方法
6.2 结果与分析
6.2.1 藻胆体荧光发射光谱
6.2.2 藻胆体解离后的荧光发射光谱
6.2.3 藻红蛋白的荧光发射光谱
6.2.4 藻胆体荧光激发光谱
6.3 讨论
7. 多管藻藻胆体稳定性的研究(一) —低浓度PBS对藻胆体的解离作用
7.1 材料与方法
7.2 结果与分析
7.2.1 PBS浓度对藻胆体稳定性的影响
7.2.2 500 mmol/L PBS条件下不同时间及调回1.0 mol/L后藻胆体荧光特性的变化
7.2.3 500 mmol/L PSS处理后藻胆体的密度梯度离xin
8. 多管藻藻胆体稳定性的研究(二) —不同离子对藻胆体稳定性的影响
8.1 材料与方法
8.2 结果
8.2.1 Na+、Mg2+、Cl-、SO4
2-对藻胆体稳定性的影响
8.2.2 一价阳离子对藻胆体稳定性的影响
8.2.3 不同一价阴离子对藻胆体稳定性的影响
8.2.4 Zn2+对藻胆体稳定性的影响
8.3 讨论
9. 多管藻藻胆体的结构分析(一) —藻红蛋白-藻蓝蛋白复合物的特性分析
9.1 材料与方法
9.2 结果与分析
9.2.1 藻红蛋白-藻蓝蛋白复合物的制备
9.2.2 藻胆蛋白各组分的吸收与荧光特性
9.2.3 藻胆蛋白各组分的差光谱分析
9.3 讨论
9.3.1 587 nm发色团的位置
9.3.2 587 nm发色团的作用
10. 多管藻藻胆体的结构分析(二) —藻红蛋白与藻胆体的稳定化处理
10.1 材料与方法
10.2 结果与分析
10.2.1 甲醛交联藻红蛋白
10.2.2 甲醛交联藻胆体
10.2.3 EDC交联藻胆体
10.3 讨论
11. 多管藻藻胆体的结构分析(三) —藻红蛋白与藻胆体的酶切分析
11.1 材料与方法
11.2 结果与分析
11.2.1 藻红蛋白的酶切分析
11.2.2 藻胆体的酶切分析
11.3 讨论
11.3.1 γ亚基的位置
11.3.2 两种蛋白酶对藻红蛋白和藻胆体的作用位点
12. 关于红藻藻胆体结构的探讨
12.1 蓝藻中的藻胆体
12.2 红藻中的藻胆体
总结
参考文献
致谢
个人简历
发表的学术论文
本文编号：3950109
【文章页数】：144 页
【学位级别】：博士
【文章目录】：
摘要
Abstract
1. 前言
1.1 海洋红藻的研究价值
1.1.1 红藻在进化上的地位
1.1.2 红藻在海洋生态系统中的地位
1.1.3 海洋红藻的研究价值
1.2 藻胆蛋白
1.2.1 藻红蛋白
1.2.2 藻蓝蛋白
1.2.3 别藻蓝蛋白
1.3 藻胆体
2. 藻红蛋白的亚基组成分析(一) —SDS-PAGE分析藻红蛋白亚基组成时的适宜条件
2.1 材料与方法
2.2 结果
2.2.1 藻红蛋白亚基组成
2.2.2 四种因素对SDS-PAGE中藻红蛋白亚基分离效果的影响
2.2.3 亚基的分子质量
2.3 讨论
2.3.1 影响藻红蛋白SDS-PAGE的关键因素
2.3.2 SDS浓度和离子浓度对标准蛋白迁移的影响
2.3.3 作用机制探讨
3. 藻红蛋白的亚基组成分析(二) —多管藻藻红蛋白中的42.1 kDa与53.7 kDa多肽
3.1 材料与方法
3.2 结果
3.2.1 SDS-PAGE分析藻红蛋白亚基组成
3.2.2 梯度native-PAGE制备之R-PE SDS-PAGE
3.2.3 R-PE第二次SDS-PAGE
3.2.4 光照对R-PE的影响
3.3 讨论
3.3.1 42.1 kDa和53.7 kDa条带的形成原因
3.3.2. γ亚基对于R-PE聚合体稳定性的作用
4. 多管藻藻红蛋白的种类和聚合体形式(一) —直接提取的粗藻胆蛋白分析
4.1 材料与方法
4.2 结果与分析
4.2.1 50 mmol/L磷酸缓冲液浸提粗藻胆蛋白Sephadex G-150层析
4.2.2 水浸提粗藻胆蛋白Sephadex G-150层析
4.2.3 水浸提粗藻胆蛋白PE315-PE360部分第二次Sephadex G-150层析
4.2.4 水浸提粗藻胆蛋白放置9 d后Sephadex G-150层析
4.3 讨论
5. 多管藻藻红蛋白的种类和聚合体形式(二) —藻胆体中的藻红蛋白
5.1 材料与方法
5.2 结果与分析
5.2.1 解离藻胆体的蔗糖密度梯度离心
5.2.2 解离藻胆体的native-PAGE分析
5.3 讨论
6. 多管藻藻胆体的光谱特性
6.1 材料与方法
6.2 结果与分析
6.2.1 藻胆体荧光发射光谱
6.2.2 藻胆体解离后的荧光发射光谱
6.2.3 藻红蛋白的荧光发射光谱
6.2.4 藻胆体荧光激发光谱
6.3 讨论
7. 多管藻藻胆体稳定性的研究(一) —低浓度PBS对藻胆体的解离作用
7.1 材料与方法
7.2 结果与分析
7.2.1 PBS浓度对藻胆体稳定性的影响
7.2.2 500 mmol/L PBS条件下不同时间及调回1.0 mol/L后藻胆体荧光特性的变化
7.2.3 500 mmol/L PSS处理后藻胆体的密度梯度离xin
8. 多管藻藻胆体稳定性的研究(二) —不同离子对藻胆体稳定性的影响
8.1 材料与方法
8.2 结果
8.2.1 Na+、Mg2+、Cl-、SO4
2-对藻胆体稳定性的影响
8.2.2 一价阳离子对藻胆体稳定性的影响
8.2.3 不同一价阴离子对藻胆体稳定性的影响
8.2.4 Zn2+对藻胆体稳定性的影响
8.3 讨论
9. 多管藻藻胆体的结构分析(一) —藻红蛋白-藻蓝蛋白复合物的特性分析
9.1 材料与方法
9.2 结果与分析
9.2.1 藻红蛋白-藻蓝蛋白复合物的制备
9.2.2 藻胆蛋白各组分的吸收与荧光特性
9.2.3 藻胆蛋白各组分的差光谱分析
9.3 讨论
9.3.1 587 nm发色团的位置
9.3.2 587 nm发色团的作用
10. 多管藻藻胆体的结构分析(二) —藻红蛋白与藻胆体的稳定化处理
10.1 材料与方法
10.2 结果与分析
10.2.1 甲醛交联藻红蛋白
10.2.2 甲醛交联藻胆体
10.2.3 EDC交联藻胆体
10.3 讨论
11. 多管藻藻胆体的结构分析(三) —藻红蛋白与藻胆体的酶切分析
11.1 材料与方法
11.2 结果与分析
11.2.1 藻红蛋白的酶切分析
11.2.2 藻胆体的酶切分析
11.3 讨论
11.3.1 γ亚基的位置
11.3.2 两种蛋白酶对藻红蛋白和藻胆体的作用位点
12. 关于红藻藻胆体结构的探讨
12.1 蓝藻中的藻胆体
12.2 红藻中的藻胆体
总结
参考文献
致谢
个人简历
发表的学术论文
本文编号：3950109
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