软骨藻酸间接竞争ELISA检测试剂盒的研制和初步应用

发布时间：2024-02-29 23:46

　　软骨藻酸(Domoic acid,DA)是由海洋硅藻中的某些拟菱形藻属产生的一种生物毒素,人类若食用被这种毒素污染的鱼贝类等海产品,会产生腹泻、呕吐、记忆丧失等症状,严重者会昏迷,甚至死亡,因此软骨藻酸又被称为失去记忆性贝毒。生物测试法和高效液相色谱法是用于检测软骨藻酸的传统方法,然均不能满足快速检测需求,严重影响海产品的食用安全。近年来,酶联免疫法(ELISA)以特异性强、灵敏度高、操作简便和检测迅速等优点被广泛应用于环境污染物的分析中。为建立软骨藻酸快速检测方法,本文成功制备软骨藻酸包被抗原DA-BSA和软骨藻酸单克隆抗体,初步组装成软骨藻酸间接竞争ELISA检测试剂盒,确定了一抗、包被抗原和二抗的最佳使用浓度、最佳封闭液和封闭条件、最佳包被条件、最佳温育温度和时间、最佳显色条件等,并对其特异性、吸光度值(optical density,OD)变异系数、阴性样品加标回收率和保质期进行测试。最后用所组装的间接竞争ELISA试剂盒与高效液相色谱法(HPLC)对实际贝类样品中软骨藻酸含量进行了测定与比较。具体结果如下:1.将牛血清蛋白与半抗原软骨藻酸偶联,成功获得包被抗原DA-BSA,并...

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【学位级别】：硕士

【部分图文】：

图１－１中国沿海赤潮分布图??Ｆｉｇｕｒｅ?１－１?Ｔｈｅ?ｔｉｄｅ?ｍａｐ?ｏｆ?Ｃｈｉｎａ?ｃｏａｓｔａｌ??

赤潮发生的次数均高于平均值；２０００－２００３年间，我国的赤潮灾害发生数逐年上升，??２００３年达到１１９次，为历史新高；２００４－２００９年赤潮发生次数总体上呈现下降趋势，??但仍远远高于２０００年的２８次［１７］。我国近年来的赤潮多发地带［１８］如图１－１所示：??Ｐｒｏｓ?....

图１－３软骨藻酸异构体Ａ－Ｈ??Ｆｉｇｕｒｅ?１－３?Ｉｓｏｍｅｒｓ?（Ａ－Ｈ）?ｏｆ?ｄｏｍｏｉｃ?ａｃｉｄ??ＤＡ?化学结构与红藻氨酸（ｋａｉｎｉｃ?ａｃｉｄ，?ｋａｉｎａｌｅ．?ＫＡ）和谷氨酸（Ｌ－Ｇｌ?

Ｆｉｇｕｒｅ?１－３?Ｉｓｏｍｅｒｓ?（Ａ－Ｈ）?ｏｆ?ｄｏｍｏｉｃ?ａｃｉｄ??ＤＡ?化学结构与红藻氨酸（ｋａｉｎｉｃ?ａｃｉｄ，?ｋａｉｎａｌｅ．?ＫＡ）和谷氨酸（Ｌ－Ｇｌｕｔａｍｉｃ?ａｃｉｄ，Ｇｌｕ）??相似，是红藻氨酸受体的兴奋剂。红藻氨酸和谷氨酸结构如

图１－４谷氨酸和红藻氨酸结构式??

Ｈ?Ｉｓｏｄｏｍｏｃ?ａｃｉｄ?Ｈ??图１－３软骨藻酸异构体Ａ－Ｈ??Ｆｉｇｕｒｅ?１－３?Ｉｓｏｍｅｒｓ?（Ａ－Ｈ）?ｏｆ?ｄｏｍｏｉｃ?ａｃｉｄ??ＤＡ?化学结构与红藻氨酸（ｋａｉｎｉｃ?ａｃｉｄ，?ｋａｉｎａｌｅ．?ＫＡ）和谷氨酸（Ｌ－Ｇｌｕｔａｍｉｃ?ａｃｉｄ，Ｇｌｕ）?....

图１－５?ＤＡ在大马哈鱼体内的分布情况??Ｆｉｇｕｒｅ?１－５?Ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ?ｄｉｓｔｒａｂｕｔｉｏｎ?ｏｆ?ＤＡ?ｉｎ?Ｓｌａｍｏｎ??

ＫａｔｈｉＡ．?Ｌｅｆｅｂｖｒｅ等［６４］对大马哈鱼（Ｏｎｃｏｒｈｙｎｃｈｕｓｋｉａｕｔｃｈ）体内不同组织中?ＤＡ??含量进行了研宄分析，发现ＤＡ在大马哈鱼的肾和胆中含量较高，在大脑和肌肉中??含量较少，图１－５是ＤＡ在大马哈鱼体内不同组织器官的分布情况：??１２０００?，??１....

本文编号：3915108