硫酸软骨素ABCⅠ酶的融合表达及传感器应用研究

发布时间：2024-03-04 22:25

　　硫酸软骨素酶(ChS ase)是一类能将硫酸软骨素(CS)催化裂解为小分子多糖的酶,根据结合的底物种类可分为ChSase ABC,ChSase AC,ChSase B和ChSase C。将普通变形杆菌(Proteus vulgaris)KCTC 2579的硫酸软骨素酶ABC (IChSase ABCⅠ)与麦芽糖结合蛋白(MBP)融合表达,构建了pMAL-c2x-ChSase ABCⅠ重组载体,并成功在大肠杆菌(Escherichia coli)BL21(DE3)宿主中高效表达。将麦芽糖结合蛋白-硫酸软骨素酶(MBP-ChSase)ABCⅠ固定在聚苯胺载体上,制备生物传感器,并利用循环伏安法对其进行检测。结果表明,MBP-ChSase ABCⅠ酶活和比酶活分别为3 180 IU/L发酵液和76 IU/mg蛋白。选择硫酸软骨素A(CS A)作为酶的反应底物,在最适反应条件下,反应的峰值电流与CS A在浓度0.1 nmol/L～0.1μmol/L范围内呈线性关系。该生物传感器对底物反应迅速,具有较高的灵敏度,可以进行有效检测。

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【文章目录】：
1 材料与方法
    1.1 材料与试剂
    1.2 仪器与设备
    1.3 方法
        1.3.1 重组质粒p MAL-c2x-Ch Sase ABC I的构建
        1.3.2 重组酶MBP-Ch Sase ABC I的表达和宿主优化
        1.3.3 重组酶MBP-Ch Sase ABC I的SDS-PAGE分析
        1.3.4 酶活及比酶活的测定
        1.3.5 酶的固定化
        1.3.6 MBP-Ch Sase ABC I生物传感器电化学性能检测
        1.3.7 底物硫酸软骨素A对传感器的影响
        1.3.8 生物传感器灵敏度测定
2 结果与分析
    2.1 PCR结果验证及序列分析
    2.2 重组酶MBP-Ch Sase ABC I的表达及宿主优化
    2.3 循环伏安图
    2.4 底物CS A浓度对生物传感器的影响
    2.5 生物传感器灵敏度
3 讨论
4 结论



本文编号：3919259