革兰阳性菌质粒提取方法的改良和质粒pLP60的序列分析

发布时间：2024-02-23 19:45

　　植物乳杆菌是乳酸菌中环境适应性最强的菌株之一,是乳酸菌研究的模式菌株。它携带的天然质粒对植物乳杆菌的生存具有重要意义。通过对植物乳杆菌天然质粒的研究能够促进植物乳杆菌的研究和运用。由于植物乳杆菌是革兰阳性菌,其细胞壁相对较厚,破壁困难,质粒提取率低,严重影响了植物乳杆菌质粒的研究和应用。就质粒的大小,多样性和数量而言,植物乳杆菌是质粒最丰富的菌株之一。植物乳杆菌PC518菌株含有多个质粒,难以分离纯化。本研究优化了质粒提取方法,提高了质粒提取率,并找到了检出细菌中多质粒体系的方法。对植物乳杆菌质粒的分析可以丰富天然质粒的数据库,为天然质粒的系统研究奠定基础。目的1.改进质粒提取方法,寻找一种提高革兰阳性菌质粒提取率的方法。2.检出植物乳杆菌PC518菌株中的新质粒。3.对新质粒进行注释和序列分析。材料和方法1.质粒提取方法的改进:在溶菌酶处理的浓度、时间、温度、溶菌酶的去除上进行改进,优化革兰阳性菌质粒提取方法。对植物乳杆菌PC518、410、9L15、JS193菌株和食窦魏斯氏菌(Weissella cibaria)M2菌株分别用改良的质粒提取方法和传统的方法提取质粒。2.用改良的质...

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【部分图文】：

图1-1不同浓度的葡萄糖溶液洗涤处理后提取植物乳杆菌PC518质粒的结果

17000×g离心1min，将收集管中的废液。换无菌微量离心管后，将30μlElutionB后，17000×g离心1min。比较，质粒DNA提取方法的可重复性和有效410、9L15、JS193菌株和食窦魏斯氏菌盒和改良的质粒提取方法提取质粒。泳与....

图1-2不同的洗涤液处理后提取植物乳杆菌PC518质粒的结果

泳道2：用5%葡萄糖溶液洗涤处理后提取的质粒DNA；泳道3理后提取的质粒DNA；泳道4：用15%葡萄糖溶液洗涤处理后提取midDNAconcentrations,theA260/A280ratiooftheplasmidDNAex.0;B:A....

图1-3用7个方案提取植物乳杆菌PC518质粒的琼脂糖电泳结果

Aobtainedbynowashingtreatment;lane2:TheplasmidDNAobtainedbyshingtreatment;lane3:TheplasmidDNAobtainedby5%glucosesolu....

图1-4用7个方案提取植物乳杆菌PC518质粒的浓度Fig.1-4TheconcentrationoftheplasmidDNAofL.plantarumPC518extractedby7

第一部分革兰阳性菌质粒提取方法的改良糖凝胶电泳的结果显示，在一定程度上，7个方案都能株中的质粒，但提取效率差异较大。在质粒的质量和P3提取的质粒都优于方案P4、P5、P6和P7。在方案8-9条明亮的条带，而在方案P4、P5和P6的泳道上有7的泳道上的条带....

本文编号：3907877