SV2A基因真核表达质粒构建及其在HEK293T细胞中的表达

发布时间：2024-02-02 13:52

　　目的构建鼠突触囊泡蛋白2A(SV2A)基因的真核表达质粒,并瞬时转染至人胚肾细胞(HEK293T)中,对其表达进行鉴定。方法以APP/PS1双转基因小鼠海马组织的cDNA为模板,扩增得到长2239bp的SV2A基因编码序列,将此序列插入到真核表达载体p3×Flag-CMV-10多克隆位点区域中,得到真核表达质粒p3×Flag-CMV-10-SV2A,转化后挑取单克隆菌落经双酶切鉴定后送公司测序,将构建成功的重组质粒转染至HEK293T细胞中,利用蛋白质印迹法(Western blot)检测SV2A基因的表达情况。结果成功构建p3×Flag-CMV-10-SV2A重组质粒,并在转染至HEK293T细胞后,验证了相应蛋白表达。结论利用分子克隆技术成功构建了p3×Flag-CMV-10-SV2A真核表达质粒并在HEK293T细胞中正确表达,为后续实验奠定了基础。

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【文章目录】：
1 材料与方法
    1.1 材料
    1.2 方法
        1.2.1 获得c DNA
        1.2.2 获得目的基因
        1.2.3 重组质粒的构建
        1.2.4 重组质粒的鉴定
        1.2.5 重组质粒的表达
        1.2.6 蛋白质印迹法 (Westernblot) 鉴定
2 结果
    2.1 SV2A全序列经PCR扩增后电泳鉴定
    2.2 重组质粒p3×Flag-CMV-10-SV2A的酶切鉴定及测序
    2.3 Westernblot分析SV2A蛋白在HEK293T细胞的表达
3 讨论
4 结论



本文编号：3892770