抑制素和JAK/STAT信号途径关键因子在甲壳动物免疫反应中的功能研究
发布时间：2024-04-21 04:07
甲壳动物是重要的经济养殖动物,甲壳动物的养殖与捕捞量占世界水产品总量的百分之十。然而,近年来水产病害频发使水产养殖业蒙受了巨大的损失。为了防控甲壳类水产养殖中病害的发生,对它们先天免疫机理的深入研究是很有必要的。虽然经过近20年的不懈努力,甲壳动物先天免疫的研究取得了显著的成果,但距离真正解决水产病害这一难题还有一定的距离,很多先天免疫的分子机制还有待揭示。 本论文中,作者从克氏原螯虾中鉴定出一种抑制素,发现其能够抑制病毒复制。还初步探讨了对虾JAK/STAT信号通路的组成以及在对虾细菌免疫中的功能与调控。 1.克氏原螯虾抑制素参与抗病毒免疫的研究 抑制素(Prohibitins,PHBs)是一类在真核生物中广泛表达的,具有很高保守性的蛋白质。它与细胞凋亡、癌症、细胞死亡、应激反应、细胞增殖以及免疫调控等众多生命反应有关。但是,PHB在甲壳动物免疫中的功能报道还很少。本研究中从克氏原螯虾中鉴定出一种抑制素,生物信息学分析确定其为抑制素1,命名为PcPHB1。PcPHB1在小龙虾各组织中广泛表达,在白班综合征病毒(WSSV)刺激后其在核酸水平和蛋白水平的表达量都有明显的提高。研究发现,在...
【文章页数】：114 页
【学位级别】：博士
【文章目录】：
摘要
Abstract
符号说明
第一章 综述
免疫系统
先天免疫
1. 抑制素研究进展
2. JAK/STAT信号通路的研究进展
3. 抗菌肽的研究进展
4. 本研究的目的
第二章 克氏原螯虾抑制素抑制白斑病毒复制
一. 引言
二. 材料与方法
1. 菌株,载体,试剂,仪器
2. 白斑病毒感染小龙虾及组织材料的收集
3. 基因克隆及其序列分析
4. 组织分布及其表达模式分析
5. 重组表达和多克隆抗体的制备
6. 蛋白水平的组织分布和表达模式分析
7. PHB1重组蛋白抑制白斑病毒复制的体内实验
8. RNA干扰实验
9. 使用Far-Western技术检测PHB1与病毒蛋白的相互作用
10. Pull-down,CoIP实验
11. 免疫细胞化学实验
12. 三维模型分析
13. 免疫胶体金实验
三. 结果
1. PHB1序列分析与鉴定
2. PHB1的组织分布
3. PHB1在病毒刺激后的表达模式
4. 病毒复制抑制试验
5. PHB1干扰和干扰后蛋白拯救时病毒复制检测
6. 小龙虾存活率统计
7. PHB1与WSSV的囊膜蛋白VP24、VP26以及VP28相互作用
8. PHB1与VP28的相互作用的3D模型
9. PHB1黏附在WSSV的表面
四. 讨论
第三章 JAK/STAT信号通路参与对虾的抗细菌免疫
一. 引言
二. 材料与方法
1. 菌株,载体,试剂,仪器
2. 实验动物与免疫刺激
3. 基因克隆,表达纯化与抗体制备
4. 基因软件分析与鉴定
5. 实时定量PCR检测组织分布与表达模式
6. 细菌结合实验
7. 多糖结合实验
8. Pull-down实验
9. RNAi实验
10. 细菌清除实验
11. 死亡率统计
12. Western blot实验
13. 免疫细胞化学实验检测MjSTAT的细胞定位
14. AMPs筛选
15. MjSOCS2和INH5抑制STAT磷酸化
三. 结果
1. 基因克隆与表达
2. MjIL-CTL、MjDome、MjSTAT和MjSOCS2的组织分布
3 弧菌刺激后MjIL-CTL、MjDome、MjSTAT和MjSOCS2在肠中的表达模式
4. MjIL-CTL能够与细菌相互作用
5. MjIL-CTL与MjDome的结合实验
6. 弧菌表面分子能够诱导STAT的磷酸化
7. STAT被磷酸化前后亚细胞定位的检测
8. MjDome参与STAT信号途径
9. JAK/STAT通路调控抗菌肽的表达
10. MjSTAT和MjSOCS2在抗弧菌免疫中的作用
四. 讨论
第四章 一种含跨膜域的甲壳肽参与细胞吞噬作用
一. 引言
二. 材料与方法
1. 菌株,载体,试剂,仪器
2. 实验动物与免疫刺激
3. 基因克隆与鉴定
4. 重组表达和抗体的制备
5. MjMCru亚细胞定位
6. 实时定量PCR和Western blot分析MjMCru表达模式
7. 液体抑菌实验
8. 细菌结合实验
9. 多糖结合实验
10. 死亡率统计
11. 细胞吞噬实验
三. 结果
1. 基因的克隆与鉴定
2. MjMCru的组织分布
3. MjMCru的亚细胞定位研究
4. MjMCru被弧菌和金黄色葡萄球菌诱导上调表达
5. WAP结构域抑制细菌的增殖
6. MjMCru能够通过结合细菌的PAMPs结合细菌
7. MjMCru多肽能够提高细菌刺激时对虾的存活率
8. MjMCru参与了细胞对细菌的吞噬过程
四. 讨论
总结和创新点
参考文献
致谢
在读期间发表的文章
学位论文评阅及答辩情况表
本文编号：3960390
【文章页数】：114 页
【学位级别】：博士
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摘要
Abstract
符号说明
第一章 综述
免疫系统
先天免疫
1. 抑制素研究进展
2. JAK/STAT信号通路的研究进展
3. 抗菌肽的研究进展
4. 本研究的目的
第二章 克氏原螯虾抑制素抑制白斑病毒复制
一. 引言
二. 材料与方法
1. 菌株,载体,试剂,仪器
2. 白斑病毒感染小龙虾及组织材料的收集
3. 基因克隆及其序列分析
4. 组织分布及其表达模式分析
5. 重组表达和多克隆抗体的制备
6. 蛋白水平的组织分布和表达模式分析
7. PHB1重组蛋白抑制白斑病毒复制的体内实验
8. RNA干扰实验
9. 使用Far-Western技术检测PHB1与病毒蛋白的相互作用
10. Pull-down,CoIP实验
11. 免疫细胞化学实验
12. 三维模型分析
13. 免疫胶体金实验
三. 结果
1. PHB1序列分析与鉴定
2. PHB1的组织分布
3. PHB1在病毒刺激后的表达模式
4. 病毒复制抑制试验
5. PHB1干扰和干扰后蛋白拯救时病毒复制检测
6. 小龙虾存活率统计
7. PHB1与WSSV的囊膜蛋白VP24、VP26以及VP28相互作用
8. PHB1与VP28的相互作用的3D模型
9. PHB1黏附在WSSV的表面
四. 讨论
第三章 JAK/STAT信号通路参与对虾的抗细菌免疫
一. 引言
二. 材料与方法
1. 菌株,载体,试剂,仪器
2. 实验动物与免疫刺激
3. 基因克隆,表达纯化与抗体制备
4. 基因软件分析与鉴定
5. 实时定量PCR检测组织分布与表达模式
6. 细菌结合实验
7. 多糖结合实验
8. Pull-down实验
9. RNAi实验
10. 细菌清除实验
11. 死亡率统计
12. Western blot实验
13. 免疫细胞化学实验检测MjSTAT的细胞定位
14. AMPs筛选
15. MjSOCS2和INH5抑制STAT磷酸化
三. 结果
1. 基因克隆与表达
2. MjIL-CTL、MjDome、MjSTAT和MjSOCS2的组织分布
3 弧菌刺激后MjIL-CTL、MjDome、MjSTAT和MjSOCS2在肠中的表达模式
4. MjIL-CTL能够与细菌相互作用
5. MjIL-CTL与MjDome的结合实验
6. 弧菌表面分子能够诱导STAT的磷酸化
7. STAT被磷酸化前后亚细胞定位的检测
8. MjDome参与STAT信号途径
9. JAK/STAT通路调控抗菌肽的表达
10. MjSTAT和MjSOCS2在抗弧菌免疫中的作用
四. 讨论
第四章 一种含跨膜域的甲壳肽参与细胞吞噬作用
一. 引言
二. 材料与方法
1. 菌株,载体,试剂,仪器
2. 实验动物与免疫刺激
3. 基因克隆与鉴定
4. 重组表达和抗体的制备
5. MjMCru亚细胞定位
6. 实时定量PCR和Western blot分析MjMCru表达模式
7. 液体抑菌实验
8. 细菌结合实验
9. 多糖结合实验
10. 死亡率统计
11. 细胞吞噬实验
三. 结果
1. 基因的克隆与鉴定
2. MjMCru的组织分布
3. MjMCru的亚细胞定位研究
4. MjMCru被弧菌和金黄色葡萄球菌诱导上调表达
5. WAP结构域抑制细菌的增殖
6. MjMCru能够通过结合细菌的PAMPs结合细菌
7. MjMCru多肽能够提高细菌刺激时对虾的存活率
8. MjMCru参与了细胞对细菌的吞噬过程
四. 讨论
总结和创新点
参考文献
致谢
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本文编号：3960390
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