溶藻弧菌群体感应系统转录因子的筛选和鉴定

发布时间：2024-04-21 02:32

　　溶藻弧菌(Vibrio alginolyticus)属革兰氏阴性菌,是重要的条件致病菌,能够引起鱼类的弧菌病,对海洋鱼类养殖产业造成经济损失。全面了解溶藻弧菌的致病机制将有助于开发高效疫苗。目前鉴定的与溶藻弧菌致病性相关的毒力因子有群体感应系统、分泌系统、铁载体摄取系统、运动性和生物被膜等,其中群体感应系统全局调控毒力因子的表达。溶藻弧菌群体感应系统的中枢元件AphA和LuxR是全局性的转录调控因子,可调控多种目的基因的表达,而人们对aphA和luxR本身受到哪些转录调控因子的调控作用却知之甚少。为了寻找溶藻弧菌中调控aphA和luxR的转录因子,我们构建了一个细菌单杂交系统。利用该系统分别筛选了aphA和luxR的转录调控因子,并对其中两个因子的调控机制进行了较为深入的分析,为解析细菌群体感应系统介导细胞密度信号和其他生理信号调控基因表达并表现多细胞群体行为打下了良好基础。本论文首先在商业化细菌双杂交系统的基础上改造得到一个新型的细菌单杂交系统,并构建了含有285个基因的溶藻弧菌转录因子文库。从文库中,分别筛选到了 99个aphA的转录调控因子及76个luxR的转录调控因子,它们分布...

【文章页数】：131 页

【学位级别】：博士

【部分图文】：

图１．１１?ＬＴＴＲ依赖性转录调控经典模型示意图１１１８１??．．－

????（ＬｙｓＲ）?ｌｙｓＲ??图１．１１?ＬＴＴＲ依赖性转录调控经典模型示意图１１１８１??Ｆｉｇ．?１．１１?Ａ?ｓｃｈｅｍａｔｉｃ?ｒｅｐｒｅｓｅｎｔａｔｉｏｎ?ｏｆ?ｔｈｅ?ｃｌａｓｓｉｃａｌ?ｍｏｄｅｌ?ｆｏｒ?ＬＴＴＲ－ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ?ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ....

图１．１４细菌单杂交系统＿??

Ｋａｎ??［Ｒｅｐｏｒｔｅｒ?Ｐｌａｓｍｉｄｓ?Ｊ?Ｚｉｎｃ?Ｆｉｎｇｅｒ?Ｐｌａｓｍｉｄｓ??图１．１５鉴定锌指－ＤＮＡ相互作用的单杂交系统［｜２７］??Ｆｉｇ．?１．１５?Ｏｎｅ－ｈｙｂｒｉｄ?ｓｙｓｔｅｍ?ｆｏｒ?ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ?ｏｆ?ｚｉｎｃ?ｆｉｎｇｅｒ－ＤＮＡ?ｉ....

图２．１溶藻弧菌群体感应系统??Ｆｉｇ．?２．１?Ｑｕｒｏｍ?ｓｅｎｓｉｎｇ?ｓｙｓｔｅｍ?ｏｆ?Ｖｉｂｒｉｏ?ａｌｇｉｎｏｌｙｔｉｃｕｓ．??

溶藻弧菌的群体感应系统类似于哈维氏弧菌群体感应系统，有三套平行的信??号通路，含三种信号分子ＡＩ－１、ＡＩ－２和ＣＡＩ－１，分别由ＬｕｘＭ、ＬｕｘＰ及ＣｑｓＡ合??成（图２．１）。当细菌浓度较低时，溶藻弧菌合成的三种信号分子浓度较低，分泌??到胞外含量较少，不能被ＬｕｘＮ、Ｌｕｘ....

图３．２?？／？／ｉ忍影响仍／７的表达??Ｆｉｇ．?３．２?ＡｐｈＢ?ｒｅｇｕｌａｔｅｓ?ｔｈｅ?ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ?ｏｆ?ａｓｐ．?Ａ．?ＨＰＡ?ｄｉｇｅｓｔｉｏｎ?

将相同剂量的野生株ＥＰＧＳ、缺失株及印Ａ５＋回补株通过肌肉注射注入斑??马鱼体内，记录４天内因溶藻弧菌感染而发生死亡的个数，比较三者之间的存活??率差异（图３．１Ｂ）。该实验中所用的斑马鱼体长均在３?ｃｍ左右，并经过２周驯养，??体征稳定。结果显示，注射野生株后的斑马鱼的存活率仅....

本文编号：3960285