嗜水气单胞菌胁迫对黄鳝抗菌肽活性及hepcidin基因表达的影响

发布时间：2024-02-02 19:39

　　黄鳝(Monopterus albus)是我国重要的淡水名优鱼类之一。随着需求的增加,其养殖面积在逐年增大。然而随着养殖面积的扩大和养殖密度的提高,养殖水体富营养化现象越来越严重,致使养殖环境恶化,病毒病、细菌病、真菌病和寄生虫病等病害不断暴发,尤其是细菌引起的出血病往往给黄鳝养殖业带来毁灭性的打击,严重制约了黄鳝养殖业的规模化生产。嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophila)是引起黄鳝疾病、危害较为严重的细菌之一。抗菌肽是鱼体非特异性免疫系统的重要组成部分,当受到损伤或病原微生物侵袭时,鱼体能迅速产生抗菌肽以预防和杀伤病原微生物。为研究黄鳝的抗病机理,本论文通过腹腔注射不同浓度的嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophila)进行诱导,采用显微测量、乙酸抽提及抑菌活性检测、荧光定量PCR等方法,研究了该细菌胁迫对黄鳝的血细胞、重要器官乙酸提取物的抗菌活性以及hepcidin抗菌肽基因表达量的影响,以期为进一步探明黄鳝的抗病机理提供参考。主要研究内容和结果如下:1.人工感染嗜水气单胞菌对黄鳝血细胞的影响随着处理组菌浓度增加,感染24h的黄鳝红细胞浓度逐渐减小,感染4...

【文章页数】：70 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
Abstract
第一章 文献综述
    1 黄鳝的研究现状
    2 嗜水气单胞菌的生物学特征及其危害
        2.1 嗜水气单胞菌的生物学特点
        2.2 嗜水气单胞菌的危害
    3 鱼类抗菌肽的研究现状
        3.1 鱼类的免疫特点
        3.2 鱼类抗菌肽的特点和类型
        3.3 抗菌肽的生物学功能
    4 荧光定量PCR技术及其应用
        4.1 荧光定量PCR技术原理
        4.2 荧光定量PCR技术在基础研究及医学领域中的应用
        4.3 荧光定量PCR技术在水产动物研究中的应用
    5 本研究的目的和意义
第二章 人工感染嗜水气单胞菌对黄鳝血细胞的影响
    1 材料与方法
        1.1 实验动物与菌株
        1.2 主要实验仪器
        1.3 方法
            1.3.1 饲养管理
            1.3.2 菌株的扩大培养
            1.3.3 黄鳝感染试验
            1.3.4 样品采集
            1.3.5 血涂片的制作与染色
            1.3.6 血细胞计数和显微测量
        1.4 数据统计分析
    2 实验结果
        2.1 黄鳝血细胞的种类及其形态特征
            2.1.1 红细胞的形态特征
            2.1.2 白细胞的形态特征
            2.1.3 血栓细胞的形态特征
        2.2 嗜水气单胞菌对黄鳝血液红细胞浓度的影响
        2.3 嗜水气单胞菌对黄鳝血液红细胞形态的影响
        2.4 嗜水气单胞菌对黄鳝血细胞组成的影响
    3 讨论
第三章 嗜水气单胞菌感染对黄鳝肝脏等四种组织器官抗菌活性的影响
    1 材料与方法
        1.1 实验动物与菌株
        1.2 主要实验仪器
        1.3 方法
            1.3.1 饲养管理
            1.3.2 菌株的扩大培养
            1.3.3 黄鳝感染实验
            1.3.4 样品采集
            1.3.5 提取抗菌肽粗提物
            1.3.6 抗菌活性的检测
        1.4 数据统计分析
    2 实验结果
        2.1 黄鳝肝脏等四种组织器官提取物的抗菌活性
        2.2 嗜水气单胞菌感染 24h后黄鳝肝脏等组织器官提取物的抗菌活性
        2.3 嗜水气单胞菌感染 48h后黄鳝肝脏等组织器官提取物的抗菌活性
        2.4 嗜水气单胞菌感染 72h后黄鳝肝脏等组织器官提取物的抗菌活性
        2.5 嗜水气单胞菌感染 96h后黄鳝肝脏等组织器官提取物的抗菌活性
    3 讨论
第四章 嗜水气单胞菌感染对黄鳝hepcidin抗菌肽基因表达的影响
    1 材料与方法
        1.1 试验动物与菌株
        1.2 主要仪器与试剂
            1.2.1 实验主要仪器
            1.2.2 主要试剂与试剂盒
        1.3 方法
            1.3.1 饲养管理
            1.3.2 菌株的扩大培养
            1.3.3 黄鳝感染试验
            1.3.4 样品采集
            1.3.5 引物设计与合成
            1.3.6 总RNA提取与检测
            1.3.7 cDNA第一链合成
            1.3.8 PCR扩增目的基因
            1.3.9 琼脂糖凝胶电泳检测目的基因
            1.3.10 荧光定量PCR反应条件
        1.4 数据统计分析
    2 实验结果
        2.1 总RNA的提取
        2.2 β-actin cDNA PCR扩增
        2.3 Hepcidin cDNA PCR扩增
        2.4 嗜水气单胞菌感染对黄鳝hepcidin抗菌肽基因表达的影响
            2.4.1 嗜水气单胞菌感染黄鳝 24h hepcidin抗菌肽基因表达量的变化
            2.4.2 嗜水气单胞菌感染黄鳝 48h hepcidin抗菌肽基因表达量的变化
            2.4.3 嗜水气单胞菌感染黄鳝 72h hepcidin抗菌肽基因表达量的变化
            2.4.4 同一处理浓度不同处理时间hepcidin抗菌肽基因的表达量变化
    3 讨论
结论
致谢
参考文献
附录



本文编号：3893056