双生病毒卫星编码的βC1蛋白与寄主MAPK途径中MKK2和MPK4蛋白的互作机制研究

发布时间：2024-04-03 00:36

　　植物双生病毒是一类在世界范围内广泛发生,造成经济作物产量严重损失的单链DNA病毒。本课题利用菜豆金色花叶病毒属双生病毒,中国番茄黄曲叶病毒(Tomato yellow leaf curl China virus,TYLCCNV)作为研究对象,通过遗传学、生物化学和分子生物学等手段对其卫星DNA(Tomato yellow leaf curl China betasatellite,TYLCCNB)编码的βC1蛋白在病毒侵染植物过程中的功能进行深入的探究。促分裂原活化蛋白激酶(mitogen-acticvated protein kinase,MAPKs)是一类真核生物中普遍存在的丝/苏氨酸蛋白激酶,由此形成的MAPK级联途径是真核生物中保守的信号传导方式,其主要作用是将外界刺激信号传入细胞内,使细胞及时作出有效的应答反应。本课题首先利用免疫沉淀的方法富集在本氏烟中瞬时表达的βC1蛋白并进行质谱分析,在βC1蛋白复合物中检测到7条匹配本氏烟MAPK激酶NbSIPKK的肽段序列,覆盖蛋白6个区域共14.4%的序列。以NbSIPKK在模式植物拟南芥中的同源物MKK2进行进一步分析,通过酵母双...

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【学位级别】：博士

【部分图文】：

图1.1双生病毒科不同属白

浙江大学博士学位论文?绪论??（Ｒｏｕｍａｇｎａｃ?ｅｔ?ａｌ．，２０１５）。该病毒属的潜在自然寄主为苜菅财（咖他ｃｒａｃｃ／ｖｏｒａ）??（Ｒｏｕｍａｇｎａｃ?ｅｔ?ａｌ．，?２０１５；?Ｖａｒｓａｎｉ?ｅｔ?ａｌ”?２０１７）。??

图３．１：免疫沉淀分离到的ｐＣｌ复合物??Ｆｉｇｕｒｅ３．１：?Ｉｓｏｌａｔｅｄ?ＰＣＩ?ｉｍｍｕｎｏｐｒｅｃｉｐｉｔａｔｅｄ?ｃｏｍｐｌｅｘ??

签的载体作为实验的对照组。用４－２０％的ＳＤＳ－ＰＡＧＥ梯度胶将（３Ｃ１复合物根据蛋??白分子量分开后，选取在（３Ｃ１复合物存在但是在对照组没有的条带进行质谱分析??（图３．?１）。??３５Ｓ：Ｆｌａｇ－??４Ｍｙｃ－ｐＣ１?ＷＴ??２５０??１５０??１００??７５?ｍｍ??一....

图３．５双分子荧光互补实验验证ＰＣＩ蛋白与ＭＫＫ２的互作

与ＭＫＫ２蛋白在植物体内的互作情况。在本氏烟叶片内瞬时表达ｎａｇ－ＭＫＪＣ２和??ＧＦＰ－（３Ｃ１融合蛋白，４８?ｈ后取样进行免疫共沉淀实验。实验中，Ｆｌａｇ－ＭＫＫ２与ＧＦＰ??空标签的组合以及植物内源蛋白Ａｃｔｉｎ为阴性对照。如图３．６所示，在免疫共沉淀??蛋白复合物中可以检....

图３．６免疫共沉淀实验验证０（：１蛋白与＾＾１＜＾２蛋白在植物体内的互作

光蛋白标记的组蛋白Ｈ２Ｂ转基因本氏烟（ＲＦＰ－Ｈ２Ｂ）叶片中共同表达，４８ｈ后通??过激光共聚焦显黴镜进行观察可以发现，ＰＣ１蛋白不能够与ＭＫＫ２蛋白的Ｎ端互??作，仅能够与Ｃ端和激酶功能域互作（图３．７）。这一结果说明ＭＫＫ２蛋白与ｐＣｌ??蛋白的互作区域在ＭＫＫ２蛋白的激酶功....

本文编号：3946442