小麦条锈菌效应蛋白pst-2511克隆表达和结构研究及PSD-95中21肽的棕榈烷基化修饰研究

发布时间：2024-01-23 15:15

　　由小麦条锈菌(Puccinia striiformis f.sp.tritic)引起的小麦条锈病是严重危害我国小麦产量的一类真菌性病害,小麦条锈菌侵染小麦的唯一结构是吸器,病原锈菌通过吸器从寄主细胞中获取营养物质,也通过吸器向其分泌大量的效应蛋白抑制寄主的防御反应。目前,对绝大多数效应蛋白的致病机理和转运机制仍不清楚,又由于绝大多数的效应蛋白从氨基酸序列上都很难找出保守结构域,使得对锈菌效应蛋白的功能研究很难深入。在此背景下,蛋白质结构生物学逐渐成为开展效应蛋白功能深入研究的重要手段。对小麦条锈菌效应蛋白的结构和功能进行研究,可以为防止小麦条锈病提供理论依据。本文中通过构建小麦条锈菌效应蛋白的基因pst-2511的原核表达载体pET-32a-PP-pst-2511,并将其在大肠杆菌BL21(DE3)中进行原核表达,表达出的蛋白用亲和层析法和高效液相色谱法进行纯化,获得可溶性的效应蛋白。通过质谱鉴定,纯化后蛋白质的分子量与理论值相符。圆二色谱表征该蛋白质的二级结构有α螺旋,且随着三氟乙醇(TFE)浓度的增加,α螺旋比例增加。TFE浓度为30%时,圆二色谱实验得出的α-螺旋、β-折叠含量与...

【文章页数】：54 页

【学位级别】：硕士

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摘要
abstract
第一章 文献综述
    1.1 小麦条锈菌致病性的研究进展
        1.1.1 小麦条锈菌的危害
        1.1.2 小麦条锈菌中吸器的作用
    1.2 病原菌效应蛋白的研究概括
    1.3 蛋白质纯化方法
        1.3.1 亲和层析
        1.3.2 离子交换层析
        1.3.3 凝胶过滤层析
        1.3.4 高效液相色谱
    1.4 蛋白质圆二色谱研究进展
    1.5 突触后膜致密物-95的概述
        1.5.1 突触后膜致密物-95结构
        1.5.2 PSD-95组织突触后的信号传导
        1.5.3 PSD-95调节突触传递及动态调节突触PSD-
        1.5.4 PSD-95蛋白的体内功能
    1.6 蛋白质的棕榈酰化
        1.6.1 棕榈酰化的机制和调控
        1.6.2 棕榈酰蛋白质组学
        1.6.3 棕榈酰化及蛋白的稳定性
        1.6.4 棕榈酰化和亚细胞转运
    1.7 阿尔茨海默病的研究进展
        1.7.1 阿尔茨海默致病机理
        1.7.2 阿尔茨海默与PSD-95关系
第二章 表达载体构建及效应蛋白pst-2511的表达与纯化
    2.1 实验材料
        2.1.1 实验菌株和试剂
        2.1.2 实验仪器
    2.2 实验内容与方法
        2.2.1 原核表达载体的构建
        2.2.2 蛋白质的诱导表达
        2.2.3 蛋白质的纯化
        2.2.4 Tricine-SDS-PAGE电泳检测
        2.2.5 M9培养基的配置
    2.3 实验结果与分析
        2.3.1 表达载体的构建与鉴定
        2.3.2 蛋白的表达与纯化
    2.4 小结
第三章 效应蛋白pst-2511的鉴定与二级结构研究
    3.1 实验材料
        3.1.1 实验试剂
        3.1.2 实验仪器
    3.2 实验内容与方法
        3.2.1 质谱分析鉴定效应蛋白
        3.2.2 生物信息学分析
        3.2.3 效应蛋白浓度的测定(BCA法)
        3.2.4 圆二色谱分析
    3.3 结果与分析
        3.3.1 质谱分析鉴定效应蛋白
        3.3.2 生物信息学预测结果
        3.3.3 效应蛋白浓度的测定
        3.3.4 效应蛋白圆二色谱结果
    3.4 小结
第四章 PSD-95中21肽的棕榈烷基化修饰研究
    4.1 实验材料
        4.1.1 实验试剂
        4.1.2 实验仪器
    4.2 实验内容与方法
        4.2.1 醋酸缓冲液和还原液的配制
        4.2.2 21肽的还原
        4.2.3 21肽的棕榈烷基化
        4.2.4 Tricine-SDS-PAGE电泳检测
        4.2.5 质谱鉴定反应产物
    4.3 结果与分析
        4.3.1 还原后的21肽在HPLC上的检测结果
        4.3.2 棕榈烷基化后的21肽在HPLC上的检测结果
        4.3.3 Tricine-SDS-PAGE电泳检测结果
        4.3.4 质谱测定结果
    4.4 小结
第五章 总结与展望
参考文献
部分缩略词
致谢
作者简介



本文编号：3882893