Clk1缺失抑制甲基苯丙胺诱导的条件性位置偏爱及其机制研究

发布时间：2024-02-03 05:25

　　毒品滥用自古以来都是一个备受瞩目的问题,不仅仅对人类的生命健康造成了不可挽回的损伤,同时也严重威胁着社会安全和经济的持续发展。甲基苯丙胺,也就是冰毒,是一种具有较强成瘾性的合成类毒品。长期、持续的使用甲基苯丙胺会产生严重的药物依赖现象,其中主要包括躯体依赖(physical dependence)以及精神依赖(psychological dependence)两个方面。不仅如此,甲基苯丙胺的戒断也被认为是难以解决的。多次、甚至是单次使用甲基苯丙胺后,它可以通过竞争性的抑制多巴胺转运体(dopaminetransporter,DAT)的功能来抑制多巴胺的摄取从而增加突触间隙多巴胺(dopamine,DA)浓度,然后可以激活大脑中的奖赏系统,最终导致成瘾。虽然对毒品滥用的研究已经持续了数百年,但是对其具体的分子机制的认识仍然十分粗浅。Clk1,也叫做Coq7,是线粒体中一种参与泛醌合成的必要的羟化酶。以此同时,Clk1在线粒体呼吸链电子传递以及氧化应激中发挥着重要的作用。本文主要探讨了 Clk1在甲基苯丙胺诱导的条件性位置偏爱中的作用,同时对其机制进行了研究。结果发现,与野生型小鼠相比,小...

【文章页数】：92 页

【学位级别】：博士

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中文摘要
Abstract
前言
第一部分 Clk1缺失抑制甲基苯丙胺诱导的条件性位置偏爱
    1. 材料与方法
        1.1 实验动物
        1.2 主要实验试剂
        1.3 主要设备
        1.4 条件性位置偏爱(Conditioned place preference)
        1.5 旷场实验(Open-field test)
        1.6 细胞培养
        1.7 蛋白免疫印记(Western blotting)
        1.8 免疫组织化学
        1.9 siRNA转染
        1.10 DAT泛素化
        1.11 贴壁细胞膜蛋白提取(Thermo kit)
        1.12 组织膜蛋白提取
        1.13 细胞病毒感染实验
    2. 数据处理和统计分析
    3. 实验结果
        3.1 Clk1缺失抑制甲基苯丙胺诱导的条件性位置偏爱
        3.2 Clk1缺失抑制伏隔核(NAc)△FosB的表达
        3.3 Clk1缺失抑制cAMP-CREB通路的激活
    4. 讨论
第二部分 Clk1缺失通过增加铁离子外排抑制多巴胺转运体降解
    1. 材料与方法
        1.1 实验动物
        1.2 主要实验试剂
        1.3 主要设备
        1.4 细胞培养与细胞系的构建
        1.5 动物组织ICP-MS样品制备
        1.6 蛋白免疫印记(Western blotting)
        1.7 总RNA的提取及实时荧光定量PCR(Q-PCR)
        1.8 细胞免疫荧光染色
    2. 数据处理和统计分析
    3. 实验结果
        3.1 Clk1^+/-突变型小鼠纹状体、海马及前额叶皮层的Clk1表白均有显著降低
        3.2 Clk1^+/--缺失增加DAT表达
        3.3 Clk1缺失抑制DAT降解而非促进合成
        3.4 Clk1缺失下调铁离子浓度
        3.5 DFO时间依赖性的上调DAT及HIF-1α
        3.6 Clk1缺失诱导的铁离子浓度降低在DAT表达升高中发挥重要作用
        3.7 Clk1^+/-突变型小鼠纹状体及海马铁离子浓度下调
    4. 讨论
参考文献
第三部分 综述
    毒品滥用的社会学思考——毒品对人类及社会的严重危害
        参考文献
    参与甲基苯丙胺成瘾以及神经毒性的研宄进展
        参考文献
攻读学位期间出版或公开发表的论著、论文
中英文缩略词对照表
致谢



本文编号：3893795