环二鸟苷酸信号转导调控结核杆菌休眠、生物膜发育和毒力

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环二鸟苷酸信号转导调控结核杆菌休眠、生物膜发育和毒力

     论文目录

摘要第1-8页

ABSTRACT第8-16页

第一章 绪论第16-48页

   ·结核病的危害与困境第16-17页

   ·结核病的发病机理第17-20页

     ·致病菌与传播方式第17-18页

     ·发病机理第18-20页

   ·MTB的遗传学基础第20-21页

   ·MTB重要致病因子第21-28页

     ·脂和脂肪酸代谢基因第21-22页

     ·氨基酸和嘌呤合成基因第22-23页

     ·金属摄取基因第23页

     ·厌氧呼吸和氧化压力蛋白第23-24页

     ·转录调控因子第24-25页

     ·响应调节因子第25-26页

     ·其它毒力因子第26-28页

   ·MTB潜伏感染与休眠第28-29页

     ·潜伏感染与休眠第28页

     ·Wayne厌氧模型第28-29页

   ·三元信号系统DosR/DosS/DosT与休眠调控第29-36页

     ·DosR系统的发现和组成第29-33页

     ·有氧呼吸与休眠程序第33页

     ·氧气和氧化还原压力感应第33页

     ·DosR系统作用机理第33-35页

     ·休眠程序在巨噬细胞和动物感染中的作用第35-36页

   ·细菌核酸类胞内二级信使第36-38页

   ·C-di-GMP信号转导第38-46页

     ·C-di-GMP合成与降解第40页

     ·C-di-GMP调控单元的信号输入第40-41页

     ·C-di-GMP受体介导信号传递第41-44页

     ·c-di-GMP信号转导的靶标和受其影响的胞内过程第44-45页

     ·GGDEF和EAL结构域蛋白的多样性第45页

     ·C-di-GMP控制单元的时空隔离第45页

     ·酶学失活的GGDEF和EAL蛋白第45-46页

   ·本课题的研究目的第46页

   ·本课题研究的技术路线第46-48页

第二章 环二鸟苷酸信号转导调控结核杆菌休眠、生物膜发育和毒力第48-102页

   ·引言第48-49页

   ·实验材料与方法第49-70页

     ·实验菌株与载体第49-52页

     ·实验所用引物第52-55页

     ·试剂第55-56页

     ·培养基第56-57页

     ·主要仪器及材料第57-58页

     ·实验用细胞和动物第58页

     ·E.coli感受态细胞制备第58页

     ·E.coli感受态热击转化第58页

     ·MTB基因组提取第58-59页

     ·基因敲除质粒构建第59-60页

     ·基因回补质粒构建第60页

     ·MTB电转化感受态细胞制备第60-61页

     ·基因敲除质粒线性化第61页

     ·基因敲除突变株构建第61-62页

     ·敲除突变株的基因回补第62-63页

     ·MTB RNA抽提第63页

     ·Microarray分析第63-64页

     ·生物信息学预测基因功能第64页

     ·RNA逆转录第64页

     ·实时荧光定量PCR第64页

     ·THP细胞感染实验第64-65页

     ·小鼠感染模型第65页

     ·脾肺脏切片与HE染色第65-66页

     ·DNA染色和荧光素酶活体染色第66页

     ·生物膜形成第66-67页

     ·MTB体外低氧生长模型第67页

     ·NAD和NADH分析第67-68页

     ·蛋白重组表达第68页

     ·蛋白纯化第68-69页

     ·c-di-GMP合成酶活性分析第69页

     ·吡啶血色原分析第69-70页

   ·实验结果第70-93页

     ·生物信息学预测MTB中可能的c-di-GMP合成酶和降解酶第70页

     ·Rv1354c和Rv1357c的重组表达第70-71页

     ·Rv1354c和Rv1354-GG具有c-di-GMP合成酶活性第71-72页

     ·GAF结构域感应氧化还原压力调控c-di-GMP合成活力第72-74页

     ·c-di-GMP合成酶和降解酶基因敲除与回补第74-76页

     ·c-di-GMP合成酶基因缺失不影响MTB正常生长第76-77页

     ·全基因转录谱分析第77-82页

     ·定量RT-PCR验证中后期培养物的休眠基因表达第82页

     ·c-di-GMP调控MTB生物膜发育第82-84页

     ·c-di-GMP合成酶缺失导致MTB的正常生长需消耗更多氧气第84页

     ·胞内氧化还原平衡需要c-di-GMP合成酶第84-85页

     ·c-di-GMP调控MTB休眠的存活和生长恢复能力第85-86页

     ·c-di-GMP合成酶缺失引起低氧条件下休眠基因下调表达第86-87页

     ·c-di-GMP受体预测第87页

     ·H37Rv基因敲除突变株筛选第87-88页

     ·基因敲除引起细胞免疫因子表达改变第88-90页

     ·Rv1357c缺失导致小鼠脾肺炎症增强和感染后期细菌存活力严重下降第90-92页

     ·Rv0195缺失导致MTB的小鼠致病力和感染后期细菌存活力严重下降第92-93页

   ·讨论第93-102页

参考文献第102-118页

附录第118-120页

致谢第120-122页

博士在读期间发表的学术论文与取得的研究成果第122页

 发表论文第122页

 申请专利第122页

 主持项目第122页

论文编号BS2225719，这篇论文共122页
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