Wnt/β-catenin信号通路在幽门螺杆菌Tipα诱导胃癌细胞EMT中的作用研究

发布时间：2024-04-17 19:49

　　目的:研究Wnt/β-catenin信号通路在幽门螺杆菌Tipα诱导胃癌SGC7901细胞形成EMT中的作用,为进一步阐明Tipα的致癌机制提供新线索。方法:大规模诱导表达Tipα,采用Ni-NTA层析法纯化,SDS-PAGE凝胶电泳和Western-blot鉴定。以不同浓度Tipα分别刺激SGC7901不同时间,q RT-PCR和Western-blot检测上皮标志物(E-cadherin、ZO-1)和间质标志物(N-cadherin、Vimentin)的表达情况;用Tipα蛋白刺激SGC7901,显微镜下观察细胞形态;Western-blot检测β-catenin Ser675和Ser552的磷酸化情况;免疫荧光观察β-catenin的核聚集和核转位。用Wnt/β-catenin通路抑制剂XAV939预处理SGC7901,再以Tipα刺激细胞,Western-blot、q RT-PCR检测上皮标志物(E-cadherin、ZO-1)和间质标志物(N-cadherin、Vimentin)的表达情况和通路下游靶基因(c-myc和cyclin D1)的表达情况;Western-blot检...

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【学位级别】：硕士

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摘要
Abstract
常用英文缩写
第1章 绪论
第2章 实验材料
    2.1 实验仪器设备
    2.2 细胞株
    2.3 主要实验试剂
第3章 实验方法
    3.1 Tipα重组蛋白的大规模诱导表达
    3.2 Tipα重组蛋白的纯化
    3.3 Tipα重组蛋白去内毒素
    3.4 蛋白浓度的测定
    3.5 SGC7901细胞复苏、培养、传代及保存
    3.6 Tipα刺激SGC7901
    3.7 实时定量PCR检测E-cadherin、ZO-1、N-cadherin、Vimentin、C-myc和CyclinD1的mRNA表达
    3.8 免疫印迹法检测E-cadherin、ZO-1、N-cadherin、Vimentin、β-catenin(Ser675和S552)、C-myc和CyclinD1的蛋白表达
    3.9 免疫荧光检测β-catenin的核聚集和核转位
    3.10 伤口愈合试验
    3.11 Transwell检测细胞迁移能力
    3.12 统计学分析
第4章 实验结果
    4.1 Tipα重组蛋白的诱导表达与鉴定
    4.2 Tipα诱导胃癌SGC7901细胞发生EMT
    4.3 Tipα激活人胃癌细胞系SGC7901 Wnt/β-catenin信号通路
    4.4 Wnt/β-catenin通路抑制剂XAV939对SGC7901细胞EMT形成的影响
第5章 讨论
第6章 结论
参考文献
综述
    参考文献
基金项目
攻读学位期间的科研成果
致谢



本文编号：3956842