滤泡性淋巴瘤pHBLV-BCL2/IgH-CAR质粒的构建与鉴定

发布时间：2024-04-14 17:19

　　目的:构建pHBLV-BCL2/Ig H-CAR质粒,为制备表达嵌合抗原受体BCL2/Ig H-CD28-CD3ζ的慢病毒奠定基础,为FL等恶性淋巴瘤的免疫治疗探索新方法。方法:(1)设计嵌合抗原受体Hinge-TM-CD28-CD3ζ片段,其中铰链区(Hinge)和跨膜区(TM)来自Ig G4 Fc(Genbank:AAB59394.1),共刺激分子来自CD28(Genbank:AF222341.1),胞内信号肽来自CD3ζ(Genbank:AK313946.1),将上述基因片段相应功能区交由生物公司合成,且各个片段之间是直接连接的。(2)利用Eco RI和Bam HI双酶切Hinge-TM-CD28-CD3ζ片段,将其克隆至慢病毒载体pHBLV-CMV-MCS-EF1-Zs Green的Eco RI和Bam HI酶切位点,获得质粒pHBLV-CD28-CD3ζ,进行琼脂糖凝胶电泳、双酶切鉴定。(3)选用BCL2/Ig H作为靶向抗原,TRIZOL法从DOHH2细胞中提取总m RNA,RT-PCR扩增、测序获得BCL2/Ig H融合基因序列,与Genbank中的BCL2基因和Ig H...

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