毛细管电泳结合电喷雾质谱分析人类癌基因c-myb四链体核酸与活性天然产物的相互作用

发布时间：2024-03-23 20:24

　　药物与靶点间的作用关系直接影响到药理和药效。药物-靶点结合能力、结合计量关系等信息是药物研发过程中必需的表征数据。人类癌基因c-myb在结直肠癌等多种癌症组织中存在过度表达,目前已成为结直肠癌、白血病等癌症疾病潜在的治疗靶点。位于癌基因c-myb启动子区的一段富含鸟嘌呤(G)的DNA序列,通过阳离子的诱导可自发折叠形成分子内G-四链体,而小分子的特异性识别可以稳定该G-四链体,进而调节基因的转录和表达过程。该文采用压力辅助毛细管电泳前沿分析(PACE-FA)结合电喷雾质谱(ESI-MS)研究人类癌基因c-myb启动子G-四链体(G4)与天然产物分子间的相互作用。PACE-FA法在毛细管电泳前沿分析(CE-FA)过程中施加一个与分析物迁移同向的压力,在保证结果准确度的前提下,能够大大加快分析速度。同时结合ESI-MS,可快速解析结合分子与靶点的亲合力和化学计量关系。首先,利用ESI-MS快速筛选出3种有亲合力的天然产物,亲合力大小依次为:土荆皮乙酸>丁溴东莨菪碱>荷叶碱。考虑到溶液相中存在特异性与非特异性结合,接着用PACE-FA法准确分析溶液相中结合的特异性和结合常数。结果...

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【部分图文】：

图1G4DNA和筛选出的3种天然产物的结构式

人类癌基因c-myb与在禽白血病病毒中发现的癌基因V-mybs同源,其编码的转录因子在造血系统和胃肠系统的细胞增殖分化和生长过程中起重要的调节作用[1-3]。近些年的研究发现,癌基因c-myb可通过维持细胞增殖和阻止细胞终止分化,来影响白血病的发生[4]。生物医学实验表明,在结直....

图2不同S1DNA(5μmol/L)溶液的CD谱图

其中,下标b、f和t分别表示物质在混合溶液中已结合的、未结合的以及总的浓度。在PACE-FA实验中,主体的浓度[H]t保持不变,改变客体的浓度[L]t。电泳曲线中的平台峰高度与未结合的客体浓度[L]f相对应,可根据标准曲线确定[L]f。再对I-[L]f进行非线性拟合,确定结合常数....

图35μmol/LS1DNA的ESI-MS图

首先,我们测定了不同浓度的K+存在下的S1DNA溶液(30mmol/LTris-HCl,pH=7.4)的CD谱图(见图2)。根据文献[34,35]报道,G4DNA溶液的CD谱图存在特征吸收峰,其位置与DNA链间的取向有关。图2中265nm附近存在一正峰,240nm附....

图4S1DNA与不同天然产物混合(物质的量之比1∶4,

接着,利用ESI-MS来进一步解析c-mybG4DNA的结构和性质。由图3可见,在不含NH4OAc的水溶液中,S1DNA存在一簇带不同电荷的去氢离子峰[S1-nH+]n-,电荷分布n为7至12。当NH4OAc浓度为25mmol/L时,S1DNA的主要离子峰变为DNA链....

本文编号：3936416