三特异性抗体构建及其对NK细胞抗肿瘤作用研究

发布时间：2024-01-29 18:08

　　随着蛋白质化学技术的突破性进展,双/多特异性抗体的构建方法和表达技术不断创新。目前绝大多数双/多特异性抗体是靶向T细胞并强化T细胞功能为原理设计的,已经进入临床试验和临床实用的产品展示出诱人前景。NK细胞是机体T细胞之外抗肿瘤的二大利器之一,本身具有广谱的肿瘤杀伤能力,尤其在对抗冷肿瘤时展现出独到的优势,近期被广泛关注。同时,NK细胞具有强大的增强T细胞抗肿瘤免疫应答的能力,是T细胞发挥抗肿瘤的功能基础。由于NK细胞在体内存活时间较短,极大地限制了它在免疫治疗中的作用。我们构建了三特异性抗体用于再导向NK细胞,以此来研究它对NK细胞抗肿瘤作用的增强效应。1、双/三特异性抗体构建、表达与鉴定我们设计并构建了三特异性抗体161519,它是由一段抗人CD16单链抗体、修饰人IL-15细胞因子和抗人CD19单链抗体组成。通过原核表达载体进行诱导表达,之后通过包涵体变、复性获得了可溶形式的蛋白,利用SDS-PAGE和质谱鉴定了纯度和精确分子量。我们也将161519分子构建到真核表达载体,通过CHO细胞表达并利用亲和层析纯化获得了纯度较高的蛋白。作为对照,我们也设计了双特异性抗体1619(在161...

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【学位级别】：博士

图１．２双特异性抗体作用机制模式图（ＡｒａｎＦ．?Ｌａｂｒｉｊｎｅｔａｌ．，２０１９）??

图１．３?ＮＫ细胞介导的肿瘤杀伤的治疗策略示意图（Ｌａｕｒａ?Ｃｈｉｏｓｓｏｎｅ?ｅｔ?ａｌ．，２０１８）?

图４．１?１６１５１９原核表达载体构建??图注：（Ａ）?１６１５１９基因元件设计模式图，１６１５１９分子包含一段抗ＣＤ１６ｓｃＦｖ，人ＩＬ－??－

图４．２?１６１５１９抗体表达条件和包涵体变复性条件探讨??

本文编号：3888587